C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
07
K
C07K 16/00 (2006.01)
Patent
CA 2632519
Multi-step systems and methods for target-molecule purification that employ column chromatography-based or membrane filtration- based polishing steps are disclosed. A target protein-containing eluate having a high residual salt concentration is collected from a first chromatography column prepared with an affinity chromatography resin, loaded onto a second chromatography column prepared with cation-exchange resin, and eluted from the cation-exchange column using a buffer in which a time-dependent pH gradient is established. A partially purified target protein-containing eluate may also be further purified by passing the target protein-containing eluate through a salt- tolerant anion exchanger.
Divers modes de réalisation de la présente invention concernent des systèmes à étapes multiples pour la purification de protéines cibles mettant en oeuvre des étapes de polissage basées sur la chromatographie sur colonne et/ou basées sur la filtration membranaire. Dans un mode de réalisation de la présente invention, un éluat contenant des protéines cibles présentant une concentration élevée de sel résiduel est recueilli à partir d'une première colonne de chromatographie préparée avec une résine de chromatographie d'affinité, chargé sur une seconde colonne de chromatographie préparée avec une résine échangeuse de cations, et élué depuis la seconde colonne de chromatographie d'échange cationique au moyen d'une solution tampon dans lequel une gradient pH variant dans le temps est établi. Dans un autre mode de réalisation de l'invention, un éluat contenant des protéines cibles partiellement purifié est recueilli depuis une colonne de chromatographie et purifié davantage par le passage de l'éluat contenant des protéines cibles à travers un échangeur d'anions tolérant le sel.
Amgen Inc.
Gowling Lafleur Henderson Llp
LandOfFree
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