Pollen-based transformation system using solid media

Details Pollen-based transformation system using solid media Pollen-based transformation system using solid media

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 5/04 (2006.01) A01H 1/00 (2006.01) A01H 4/00 (2006.01) C12N 15/82 (2006.01) C12N 15/84 (2006.01)

Patent

CA 2296501

A medium is disclosed that supports pollen germination and pollen tube growth in the presence of Agrobacterium, the medium comprising agarose, sucrose, NO3, MnSO4, 1-13BO3, MgSO4 and gibberellic acid. A method is disclosed for the genetic transformation of plants and lines by a pollen-based Agrobacterim-mediated transformation. The method comprises the steps of obtaining pollen from a first plant, applying a lawn of Agrobacteria to a solid pollen culture medium, the Agrobacterium comprising at least one heterologous gene sequence capable of being transferred to a plant cell, applying the pollen to the solid medium, allowing the pollen to germinate and grow on the medium, whereby the Agrobacterium attaches to the pollen tube or mediates transfer of the heterologous gene sequence to the germinating pollen to obtain transgenic pollen, applying the transgenic pollen to the stigma of a second plant capable of being fertilized by the pollen of the first plant, thereby fertilizing the second plant, obtaining transgenic seed from the second plant and germinating the transgenic seed to obtain a transgenic plant. The method is particularly suited for use with so-called "dry stigma" pollen.

L'invention concerne un milieu de support de germination pollinique et de croissance du tube pollinique, en présence d'Agrobacterium, le milieu comprenant de l'agarose, du sucrose, NO3, MnSO4, H3BO3, MgSO4 et de l'acide gibbérellique. L'invention concerne également un procédé de transformation génétique de plantes et de lignées consistant à induire une transformation pollinique au moyen d'Agrobacterium. Le procédé comprend les étapes consistant à obtenir du pollen d'une première plante, à appliquer un tapis d'Agrobacterium sur un milieu de culture pollinique solide, Agrobacterium comprenant au moins une séquence génique hétérologue pouvant être transférée à une cellule végétale, à appliquer le pollen sur le milieu solide, à permettre au pollen de germer et de pousser sur ce milieu, Agrobacterium se fixant sur le tube pollinique ou induisant le transfert de la séquence génique hétérologue vers le pollen en cours de germination, afin de produire du pollen transgénique, à appliquer ce pollen transgénique sur le stigmate d'une seconde plante pouvant être fertilisée par le pollen de la première plante, ce qui a pour effet de fertiliser la seconde plante, puis à obtenir une graine transgénique à partir de cette seconde plante et à faire germer cette graine transgénique pour obtenir une plante transgénique. Le procédé est notamment conçu pour être utilisé avec le pollen dénommé "stigmate sec".

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