C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)
Patent
CA 2362245
Disclosed is a method for determining a sequence of one or more nucleotides in a target polynucleotide. In the method, a target-specific primer is contacted with a polynucleotide sample under conditions effective for the primer to anneal specifically to a primer-complementary region in one or more target polynucleotides, to form one or more target-primer hybrid(s), wherein each target-specific primer contains (i) a target binding segment and (ii) a mobility-reducing moiety which does not bind the target. The hybrid(s) are reacted with a primer extension reagent in the presence of at least one labeled 3'-nucleotide terminator complementary to a selected nucleotide base-type, optionally in the presence of one or more extendable nucleoside monomers, under conditions effective to form one or more primer extension products which terminate with at least one labeled 3'-nucleotide terminator. The primer extension products are then separated electrophoretically in a sieving matrix under denaturing conditions such that smaller extension products migrate more rapidly than larger extension products, and the desired sequence information is determined.
L'invention concerne une technique permettant de déterminer une séquence d'un ou plusieurs nucléotides dans un polynucléotide cible. Dans cette technique, une amorce spécifique d'une cible est mise en contact avec un échantillon de polynucléotide dans des conditions efficaces telles que ladite amorce fusionne de manière spécifique avec une région complémentaire de l'amorce dans un ou plusieurs polynucléotides cibles, afin de former un ou plusieurs hybrides d'amorces cibles, chaque amorce spécifique d'une cible contenant I) un segment de liaison de cible, et ii) une fraction de réduction de mobilité qui ne se lie pas à ladite cible. Les hybrides sont mis à réagir avec un réactif d'extension d'amorce en présence d'au moins un agent de terminaison de 3'-nucléotide marqué, complémentaire d'un type de nucléotide de base sélectionné, éventuellement en présence d'un ou plusieurs monomères de nucléotide pouvant être étendu, dans des conditions efficaces pour former un ou plusieurs produits d'extension d'amorce, qui se terminent avec au moins un agent de terminaison de 3'-nucléotide marqué. Les produits d'extension d'amorce sont ensuite séparés par électrophorèse dans une matrice de tamisage dans des conditions de dénaturation telles que les produits d'extension les plus petits migrent plus rapidement que les produis d'extension les plus grands, et que les informations de séquence désirées sont déterminées.
Madonik Alex M.
Mcginnis Malcolm D.
Applied Biosystems Llc
Pe Corporation (ny)
Sim & Mcburney
LandOfFree
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