C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
07
K
C07K 1/22 (2006.01) C07K 14/47 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/12 (2006.01) C12N 15/67 (2006.01) C12N 15/87 (2006.01)
Patent
CA 2423117
The invention provides a process for preparing capped mRNAs from an RNA mixture, e.g. whole RNA isolated from a cell or tissue extract, that includes combining in a reaction mixture RNA comprising capped mRNA with a separable affinity matrix having high-affinity eIF4E bound thereto, under conditions sufficient for binding to occur between the high-affinity eIF4E and the capped mRNA, whereby capped mRNA is bound to the affinity matrix, separating the affinity matrix from the reaction mixture, then separating the capped mRNA from the affinity matrix. High affinity eIF4E mutants previously described are employed in the process as well as a novel mutant disclosed and claimed herein. The mRNA preparation process is based on isolation of 5'-capped mRNA. The mRNA molecules thus isolated have intact sequences encoding the NH2- terminal ends of the proteins they encode, unlike those isolated by prior methods. In addition, use of the method isolates mRNA sequences not isolatable by prior methods that relied on binding to polyadenylated 3'-end sequences.
L'invention concerne une méthode de préparation d'ARNs messagers à partir d'un mélange d'ARN, par exemple un ARN entier isolé d'une cellule ou d'un extrait tissulaire, consistant à combiner dans un mélange de réaction un ARN comprenant un ARNm à coiffe avec une matrice d'affinité pouvant être séparée à laquelle est liée un eIF4E à haute affinité, dans des conditions propices à la liaison entre le eIF4E à haute affinité et l'ARNm à coiffe, l'ARNm à coiffe étant ainsi lié à la matrice d'affinité. Ladite méthode consiste ensuite à séparer la matrice d'affinité du mélange de réaction, puis à séparer l'ARNm à coiffe de la matrice d'affinité. Les mutants eIF4E à haute affinité décrits antérieurement sont utilisés dans cette méthode, ainsi qu'un nouveau mutant spécifié dans les revendications. La méthode de préparation d'ARNm est basée sur l'isolement de l'ARNm à coiffe en 5'. Les molécules d'ARNm ainsi isolées comprennent des séquences intactes codant pour les extrémités de terminaison NH¿2? des protéines codées, contrairement à celles isolées selon des méthodes classiques. De plus, l'utilisation de cette méthode permet d'isoler des séquences d'ARNm ne pouvant être isolées par des méthodes classiques basées sur la liaison à des séquences d'extrémité 3' polyadénylées.
Emory University
Mckay-Carey & Company
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1530764