C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/01 (2006.01) C12N 1/16 (2006.01) C12N 15/81 (2006.01)
Patent
CA 2261020
Methods for preparing Pichia methanolica cells having auxotrophic mutations are disclosed. The methods comprise the steps of: (a) exposing P. methanolica cells to mutagenizing conditions; (b) culturing the cells from step (a) in a rich medium to allow mutations to become established and replicated in at least a portion of the cells; (c) culturing the cells from step (b) in a culture medium deficient in assimilable nitrogen to deplete cellular nitrogen stores; (d) culturing the cells from step (c) in a defined culture medium comprising an inorganic nitrogen source and an amount of nystatin sufficient to kill growing P. methanolica cells to select for cells having a deficiency in a nutritional gene; and (e) culturing the selected cells from step (d) in a rich culture medium.
Procédés de préparation de cellules de Pichia methanolica à mutations auxotrophes, qui comprennent les étapes suivantes: (a) exposition de cellules de P. methanolica à des conditions de mutagenèse, (b) mise en culture de cellules issues de (a) dans un milieu riche pour l'établissement et la réplication de mutations au moins dans une partie des cellules, (c) mise en culture de cellules de (b) dans un milieu de culture déficient en azote assimilable pour appauvrir les unités cellulaires de stockage d'azote, (d) mise en culture de cellules de (c) dans un milieu de culture définie renfermant une source d'azote inorganique et une quantité de nystatine suffisante pour tuer les cellules de P. methanolica en développement afin de sélectionner les cellules à déficience en gènes nutritionnels; et (e) mise en culture de cellules sélectionnées à partir de (d) dans un milieu de culture riche.
Smart & Biggar
Zymogenetics Inc.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1487732