G - Physics
01
N
G01N 33/68 (2006.01)
Patent
CA 2684796
The invention relates to an assay method for detecting the presence of PrPSc using at least one sequence-specific protease for a substantially complete digestion of the proteins in a sample, leaving the octarepeat region in both PrPSc and PrPC intact, leaving the protease-resistant core of PrPSc intact and remain connected to the octarepeat region, while digesting away at least part of the amino acid sequences in PrPC corresponding to the protease-resistant core in PrPSc. The method further comprises a step of inhibiting further digestion by the protease, a step of denaruration, and a step of detecting the presence of PrPSc using at least two binding partners, a first binding partner and a second binding partner, wherein the first binding partner specifically binds an epitope in the amino-proximal region, and the second binding partner specifically binds an epitope within a region of the protease-resistant core of PrPSc that has been cleaved away in PrPC. The invention also relates to a kit comprising reagents that can be used in the assay method.
Cette invention concerne un procédé de dosage biologique permettant de détecter la présence de PrPSc au moyen d'au moins une protéase spécifique d'une séquence pour obtenir une digestion essentiellement complète des protéines dans un échantillon, en laissant la région octarepeat dans PrPSc et dans PrPC intacte, en laissant le noyau résistant aux protéases de PrPSc intact et en le maintenant relié à la région octarepeat, tout en assurant la digestion, au moins en partie, des séquences d'acides aminés dans PrPC correspondant au noyau résistant aux protéases dans PrPSc. Le procédé décrit dans cette invention comprend également l'étape qui consiste à empêcher une digestion supplémentaire par la protéase, une étape de dénaturation et une étape qui consiste à détecter la présence PrPSc au moyen d'au moins deux partenaires de liaison, un premier partenaire de liaison et un second partenaire de liaison; le premier partenaire de liaison se liant spécifiquement à un épitope dans la région amino-proximale, et le second partenaire de liaison se liant spécifiquement à un épitope à l'intérieur d'une région du noyau résistant aux protéases de PrPSc lequel a été clivé dans PrPC. Cette invention concerne également une trousse comprenant des agents de réaction pouvant être utilisés dans ce procédé de dosage biologique.
Peretz David
Yam Alice
Borden Ladner Gervais Llp
Novartis Ag
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1408005