Process for preparing inclusion body-forming protein

Details Process for preparing inclusion body-forming protein Process for preparing inclusion body-forming protein

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/09 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01) C12N 9/64 (2006.01)

Patent

CA 2741214

A process for preparing an inclusion body-forming protein is provided. A nucleic acid fragment consisting of a nucleotide sequence coding for a modified alkaline phosphatase signal peptide (modified APSP) where leucine at the 13th position in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1 is substituted with proline and/or alanine at the 21st position is substituted with the other amino acid, downstream of which nucleotide sequence is bound a nucleotide sequence of a gene of a protein of interest, and a process for preparing an inclusion body-forming protein consisting of the following steps: (1) preparing an expression vector in which a nucleic acid fragment is incorporated consisting of a nucleotide sequence coding for a modified signal peptide downstream of which is bound a nucleotide sequence of a gene of a protein of interest, (2) preparing a host cell transformed with the expression vector that produces an inclusion body-forming protein, and (3) purifying the inclusion body-forming protein from culture obtained by culturing the host cell that produces the inclusion body-forming protein. The above other amino acid is selected from the group consisting of aspartic acid, glutamic acid, lysine, histidine, phenylalanine and tyrosine.

L'invention concerne un procédé de production d'une protéine capable de former un corps d'inclusion. L'invention concerne spécifiquement un fragment d'acide nucléique qui comprend une séquence comportant : une séquence nucléotidique codant pour un peptide signal modifié de la phosphatase alcaline qui est produit par substitution d'un résidu de leucine en position 13 dans la séquence d'acides aminés décrite dans SEQ ID N°1 par un résidu de proline et/ou substitution d'un résidu d'alanine en position 21 dans la séquence d'acides aminés décrite dans SEQ ID N°1 par un autre résidu d'acide aminé; et une séquence nucléotidique pour un gène protéique souhaité, qui est lié en aval de la séquence nucléotidique susmentionnée. L'invention concerne aussi spécifiquement un procédé de production d'une protéine capable de former un corps d'inclusion, qui comprend les étapes (1) à (3) suivantes consistant à : (1) préparer un vecteur d'expression dans lequel est intégré un fragment d'acide nucléique comprenant une séquence composée d'une séquence nucléotidique codant pour un peptide signal modifié et une séquence nucléotidique pour un gène protéique souhaité qui est lié en aval de la séquence nucléotidique susmentionnée; (2) préparer un hôte qui peut produire une protéine capable de former un corps d'inclusion, ledit hôte ayant été transformé par le vecteur d'expression; et (3) mettre en culture l'hôte pour produire une culture et purifier la protéine provenant de la culture. L'autre résidu d'acide aminé susmentionné est choisi dans le groupe comprenant l'acide aspartique, l'acide glutamique, la lysine, l'histidine, la phénylalanine et la tyrosine.

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