Process for producing lactonase and utilization thereof

Details Process for producing lactonase and utilization thereof Process for producing lactonase and utilization thereof

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 1/15 (2006.01) C12N 9/18 (2006.01) C12N 15/55 (2006.01) C12P 17/04 (2006.01)

Patent

CA 2518402

It has been required to economically produce a large amount of an optically active .gamma.-lactone derivative (for example, pantolactone) which is useful as an intermediate in synthesizing a useful substance such as a drug. To achieve this object, it is advantageous to employ a technique of enzymatic asymmetric hydrolysis with the use of an enzyme lactonase. However, it remains troublesome to prepare the enzyme or utilize a microorganism capable of producing the enzyme. Also, it is difficult to obtain a sufficient and stable enzymatic activity in the case of using recombination techniques. In producing lactonase, which asymmetrically hydrolyzes a .gamma.-lactone derivative such as racemic pantolactone selectively, by a recombination technique, maturation lactonase DNA and signal peptide region DNA are both transferred into a host. Thus, a stable activity comparable to that of natural lactonase can be achieved and a transformant having a high enzyme activity and sustaining it in a stable state can be obtained. As a result, it becomes possible to efficiently and industrially advantageously perform the asymmetric synthesis of a .gamma.-lactone derivative.

Selon cette invention, il s'est révélé nécessaire de produire économiquement une grande quantité d'un dérivé de .UPSILON.-lactone optiquement actif (tel que la pantolactone) servant d'intermédiaire dans la synthétisation d'une substance utile telle qu'un médicament. Pour ce faire, il convient de recourir à une technique d'hydrolyse asymétrique enzymatique faisant appel à une enzyme lactonase. Il demeure toutefois problématique de préparer l'enzyme ou d'utiliser un micro-organisme capable de produire cette enzyme. Il est par ailleurs difficile d'obtenir une activité enzymatique suffisante et stable dans le cas de l'utilisation de techniques de recombinaison. Lors de la production de lactonase, qui hydrolyse de façon asymétrique un dérivé de .UPSILON.-lactone, tel que la pantolactone racémique sélectivement, au moyen d'une technique de recombinaison, l'ADN de lactonase de maturation et l'ADN de la région de peptide signal sont tous deux transférés chez un hôte. Une activité stable comparable à celle de la lactonase naturelle peut ainsi être obtenue et un transformant présentant une activité enzymatique élevée et conservant cette activité dans un état stable peut être produit. Par conséquent, il est dorénavant possible d'effectuer de façon efficace et industrielle la synthèse asymétrique d'un dérivé de .UPSILON.-lactone.

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