Process for purifying factor viii

Details Process for purifying factor viii Process for purifying factor viii

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 9/99 (2006.01) A61K 38/37 (2006.01) C07K 14/755 (2006.01)

Patent

CA 2202875

Proteases generally tend to reduce the activity of coagulation factor VIII by degrading the molecule. The present invention relates to a process for reducing the detrimental influence of metal-dependent proteases upon recombinant factor VIII molecules, by adding an inhibitor of metal-dependent proteases to a solution after harvest. The solution is suitably the harvest solution or any aqueous solution being fed to or leaving the primary isolation, being the initial step of the purifying sequence. The inhibitor is selected from: i) complexing agents with a stronger affinity for the metal ion of the protease than for the ion or ions stabilizing the factor VIII molecule and ii) compounds structurally related to the natural substrate of the protease and containing an electronegative moiety. The presence of an inhibitor, preferably a complexing agent, after harvest allows for a prolonged harvest period and considerably higher yield with essentially retained factor VIII activity. The invention further relates to an aqueous solution containing recombinant factor VIII which has been purified according to the present process and use of such an aqueous solution, for the manufacture of a medicament for administration to a patient having the symptoms of hemophilia. Also, the invention relates to a method for treatment of hemophilia by administration of a therapeutically effective amount of recombinant factor VIII which has been purified according to the present process.

Les protéases tendent généralement à réduire l'activité du facteur de coagulation VIII en dégradant sa molécule. Un procédé permet de limiter l'influence néfaste des protéases dépendantes des métaux sur des molécules du facteur VIII recombiné, par l'adjonction d'un inhibiteur des protéases dépendant des métaux à une solution après la récolte. Cette solution peut être la solution de récolte ou toute solution aqueuse introduite dans l'étape d'isolation primaire ou la quittant, celle-ci étant l'étape initiale de la séquence de purification. L'inhibiteur est choisi parmi: 1) des agents complexants qui présentent plus d'affinité pour l'ion métal de la protéase que pour celui ou ceux stabilisant la molécule du facteur VIII, et 2) des composés à structure apparentée au substrat naturel de la protéase et contenant une fraction électronégative. La présence d'un inhibiteur - un agent complexant de préférence - après la récolte permet une période de récolte prolongée et une production considérablement supérieure ainsi que le maintien de l'essentiel de l'activité du facteur VIII. L'invention concerne également une solution aqueuse contenant du facteur VIII recombiné qui a été purifié par ce procédé ainsi que l'utilisation d'une telle solution aqueuse pour fabriquer un médicament devant être administré à un patient qui présente des symptômes d'hémophilie. Un procédé permet de traiter l'hémophilie par l'administration d'une quantité thérapeutiquement efficace du facteur VIII recombiné qui a été purifié selon ce procédé.

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