C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/12 (2006.01) A61K 47/48 (2006.01) C07K 14/805 (2006.01) C12N 15/81 (2006.01) G01N 33/72 (2006.01) A61K 38/00 (2006.01)
Patent
CA 2050601
Alpha subunits of hemoglobin are provided as a novel recombinant di-alpha globin polypeptide comprising the two alpha subunits connected directly via peptide bond or indirectly by a flexible amino- acid or peptide linker. Di-alpha globin may be combined in vivo or in vivo with beta globin and heme to form hemoglobin. Tetrameric human hemoglobin and di-alpha/beta 2 hemoglobin are produced in S. cerevisiae by three types of expression vectors: (1) two separate plasmids containing respectively alpha and beta globin genes expressed in diploid strains; (2) a single plasmid comprising alpha and beta globin genes expressed in either haploid or diploid strains; (3) a single plasmid containing di-alpha and beta globin genes expressed in haploid strains. Tetrameric form or separate subunits can be recovered from the soluble fraction. So, three types of hemoglobin-like molecules can be produced: di-alpha/ two beta, di-beta/ two alpha or di-alpha/ di-beta, with a long half-life.
Des sous-unités alpha d'hémoglobine forment un polypeptide recombinant nouveau de globine di-alpha qui comprend deux sous-unités alpha directement interconnectées par un lien peptide ou indirectement par un acide aminé ou par un peptide flexibles de liaison. On peut associer in vivo ou in vitro la globine di-alpha avec de la globine bêta et de l'héma afin de former de l'hémoglobine. L'hémoglobine humaine tétramère et l'hémoglobine di-alpha/bêta 2 sont produites dans S. cerevisiae par trois types de vecteurs d'expression, (1) deux plasmides séparés qui contiennent respectivement des gènes de globine alpha et de globine bêta exprimés dans des souches diploïdes; (2) un seul plasmide qui contient des gènes de globine alpha et bêta exprimés dans des souches haploïdes ou diploïdes; (3) un seul plasmide qui contient des gènes de globine di-alpha et bêta exprimés dans des souches haploïdes. On peut récupérer dans la fraction soluble la forme tétramère ou des sous-unités séparées. On peut ainsi produire trois types de molécules similaires à l'hémoglobine: di-alpha/ bêta 2, di-bêta/ alpha 2 ou di-alpha/di-bêta, avec une longue demi-vie.
Hoffman Stephen J.
Looker Douglas L.
Nagai Kiyoshi
Rosendal Mary S.
Stetler Gary L.
Baxter Biotech Technology S.a.r.l.
Medical Research Council
Smart & Biggar
Somatogenetics International Inc.
LandOfFree
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