Production of cytotoxic antibody-toxin fusion in eukaryotic...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 15/82 (2006.01) A61K 38/16 (2006.01) A61K 47/48 (2006.01) C07K 19/00 (2006.01) C12N 1/13 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01) C07K 14/415 (2006.01) C07K 16/28 (2006.01)

Patent

CA 2705289

Methods and compositions are disclosed to engineer chloroplast comprising heterologous genes encoding target binding domain fused to a eukaryotic toxin and produced within a subcellular organelle, such as a chloroplast. The present disclosure demonstrates that when chloroplasts are used, toxins normally refractive to production in eukaryotic cells may be used to produce recombinant fusion proteins with binding domains that are soluble, properly folded and post-translationally modified, where the multifunctional activity of the fusion protein is intact. The binding domains may include those from antibodies, receptors, hormones, cytokines, chemokines, and interferons. The present disclosure also demonstrates the utility of plants, including green algae, for the production of complex multi-domain proteins as soluble bioactive therapeutic agents.

L'invention concerne des procédés et des compositions pour fabriquer un chloroplaste comprenant des gènes hétérologues codant un domaine de liaison cible fusionné à une toxine eucaryotique et produits dans un organelle sub-cellulaire, tel qu'un chloroplaste. Il est démontré dans la présente invention que lorsqu'on utilise des chloroplastes, les toxines normalement réfractaires à la production dans des cellules eucaryotiques peuvent être utilisées pour produire des protéines de fusion recombinantes avec des domaines de liaison qui sont solubles, et correctement repliés et modifiés après traduction, l'activité multifonctionnelle de la protéine de fusion restant intacte. Les domaines de liaison peuvent comprendre ceux d'anticorps, de récepteurs, d'hormones, de cytokines, de chimiokines et d'interférons. La présente invention démontre également l'utilité des plantes, notamment les algues vertes, pour la production de protéines multi-domaine complexes comme agents thérapeutiques bioactifs solubles.

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