C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/85 (2006.01)
Patent
CA 2469135
Plasmid vectors for expression in Caenorhabditis elegans harbouring a heat inducible promoter nucleotide sequence, a synthetic intron nucleotide sequence optionally containing a Shine-Dalgarno sequence for efficient shuttling between C. elegans and E. coli, optionally a nucleotide sequence coding for a nuclear localisation signal or secretion signal, a nucleotide sequence coding for a recognisable tag, optionally a nucleotide sequence coding for a fluorescent protein, a nucleotide sequence coding for a protease cleavage site, a multiple cloning site containing a nucleotide sequence coding for an eukaryotic, such as human, protein or a nucleic acid molecule and a nucleotide sequence coding for termination of translation, are described. Methods of particularly large scale production of eukaryotic, such as human, proteins and nucleic acid molecules in nematodes are also described. The methods comprise injection one or several different plasmid vectors into the gonad of C. elegans hermaphrodites, cultivating the nematodes in growth medium, optionally comprising labeled bacteria as feed for the nematodes, at temperatures below 25~C, followed by shifting to 30 -33~C for induction of eukaryotic protein or nucleic acid molecule expression in several hundred somatic cells, with highest expression levels in neuronal and epidermal cells, and isolating the eukaryotic protein or nucleic acid molecule from said cells.
L'invention concerne des vecteurs plasmidiques d'expression dans Caenorhabditis elegans hébergeant une séquence de nucléotide promoteur inductible par la chaleur, une séquence nucléotidique d'intron synthétique contenant éventuellement une séquence Shine-Dalgarno pour un transfert efficace entre C. elegans et E. coli, éventuellement une séquence nucléotidique codant pour un signal de localisation nucléaire ou pour un signal de sécrétion, une séquence nucléotidique codant pour un marqueur reconnaissable, éventuellement une séquence nucléotidique codant pour une protéine fluorescente, une séquence nucléotidique codant pour un site de scission de protéase, un site de clonage multiple contenant une séquence nucléotidique codant pour une molécule de protéine ou d'acides nucléiques, notamment humains, et une séquence nucléotidique codant pour la terminaison d'une traduction. L'invention concerne aussi des procédés de production à grande échelle de molécules de protéines et d'acides nucléiques, notamment humains, dans des nématodes. Ces procédés consistent à injecter un ou plusieurs vecteurs plasmidiques différents dans les gonades deC. elegans hermaphrodites, à cultiver les nématodes dans un milieu de croissance, éventuellement à alimenter les nématodes en bactéries marquées, à des températures inférieures à 25 ·C, passant à 30 -33 ·C pour l'induction de l'expression de molécules d'acides nucléiques ou de protéines dans plusieurs centaines de cellules somatiques, les taux de plus grande expression prenant place dans les cellules neuronales et épidermiques, et à isoler les molécules d'acides nucléiques ou de protéines de ces cellules.
Sauer Uwe H.
Tuck Simon
Fetherstonhaugh & Co.
Nexyte Ab
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1731995