Production of functional hybrid genes and proteins

Details Production of functional hybrid genes and proteins Production of functional hybrid genes and proteins

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/10 (2006.01) C07K 14/435 (2006.01) C12N 9/02 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2386090

The invention relates to an improved method for creating gene and protein libraries, particularly random gene libraries encoding for hybrid proteins containing fragments from one or two parent proteins. The method may be used to make libraries of circularly permuted variants of genes encoding a single protein or hybrid proteins, especially single chain proteins. In addition, the invention can be used to make libraries for protein fragment complementation, in which the two fragments originate from one parent protein or from two different parent proteins. The method can produce a library of genes mostly of the correct size, leading to a high fraction of functional hybrids or complements. When coupled with suitable screening or selection, the method can be used to create and identify hybrid proteins, including new proteins with new or altered properties. The invention also provides libraries of hybrid proteins, especially single-chain proteins, that include an N-terminal sequence originating from one parent protein, fused to a C-terminal sequence of a second parent protein, with both sequences varying in length among the hybrids of the library.

L'invention concerne un procédé amélioré de création de bibliothèques de gènes et de protéines, en particulier de bibliothèques de gènes aléatoires codant pour des protéines hybrides contenant des fragments d'une ou de deux protéines parentes. Le procédé permet de produire des bibliothèques de variants de gènes à permutation circulaire codant pour une protéine simple ou des protéines hybrides, notamment des protéines à chaîne simple. En outre, on peut également produire des bibliothèques de complémentation de protéines-fragments dans lesquelles les deux fragments proviennent d'une ou de deux protéines parentes. Le procédé permet de produire une bibliothèque de gènes de taille généralement correcte, menant à une fraction élevée d'hybrides ou de compléments fonctionnels. Couplé à un criblage ou une sélection approprié, le procédé permet de créer et d'identifier des protéines hybrides, y compris de nouvelles possédant des propriétés nouvelles ou modifiées. L'invention concerne également des bibliothèques de protéines hybrides, notamment des protéines à chaîne simple, qui renferment une séquence N-terminal provenant d'une protéine parente, fusionnée à une séquence C-terminal d'une seconde protéine parente, la longueur des deux séquences variant entre les hybrides de la bibliothèque.

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