C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/65 (2006.01) C12P 21/04 (2006.01)
Patent
CA 2761578
Provided herein are methods and compositions for expression of a nucleic acid construct comprising nucleic acids encoding a) a recombinant polypeptide, and b) a prototrophy-restoring enzyme in a host cell that is auxotrophic for at least one metabolite. In various embodiments, the host cell is auxotrophic for a nitrogenous base compound or an amino acid. The invention involves introducing an analogue into the growth media for the host cell such that the analogue is incorporated into the recombinant polypeptide or a nucleic acid coding sequence thereof. In various embodiments, the compositions and methods disclosed herein result in improved recombinant protein expression compared to expression of recombinant protein in an antibiotic selection system, or compared to expression of the recombinant protein in an expression system that lacks a metabolite analogue.
Méthodes et compositions relatives à l'expression d'une construction d'acides aminés comprenant des acides nucléiques codant pour a) un polypeptide de recombinaison et b) un enzyme de restauration de la prototrophie dans une cellule hôte qui est auxotrophique pour au moins un métabolite. Dans divers modes de réalisation, la cellule hôte est auxotrophique pour un composé à base azotée ou un acide aminé. L'invention consiste à introduire un analogue dans un milieu de croissance pour la cellule hôte de sorte que cet analogue soit incorporé dans le polypeptide de recombinaison ou dans une séquence de codage d'acides aminés de ce polypeptide. Dans divers modes de réalisation, les compositions et méthodes présentées ici permettent de parvenir à un expression améliorée de la protéine de recombinaison dans un système de sélection antibiotique ou à celle de la protéine de recombinaison dans un système d'expression auquel manque un analogue métabolitique.
Chew Lawrence C.
Retallack Diane M.
Squires Charles H.
Pfenex Inc.
Sim & Mcburney
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1585366