C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) C07K 14/315 (2006.01) C07K 17/00 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) G01N 33/533 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)
Patent
CA 2443067
A method of forming an array of proteins selected from antigens or antibodies; said method comprising the steps of (i) expressing in a recombinant cell, a fusion protein which ocmprises either (a) an antigen or (b) an antibody binding protein, fused to a peptide having up to 50 amino acids, which peptide comprises amino acid sequence of SEQ ID NO 1 LX1X2IX3X4X5X6KX7X8X9X10 (SEQ ID NO 1) where X1 is a naturally occurring amino acid, X2 is any naturally occurring amino acid other than leucine, valine, isoleucine, tryptophan, phenylalanine or tyrosine, X3 is phenylalanine or leucine, X4 is glutamine or asparagine, X5 is alanine, glycine, serine or threonine, X6 is glycine or methionine, X7 is isoleucine, methionine or valine, X8 is glutamine, leucine, valine, tyrosine or isoleucine, X9 is tryptophan, tyrosine, valine, phenylalanine, leucine or isoleucine and X10 is any naturally occurring amino acid other than asparagine or glutamine; where said peptide is capable of being biotinylated by a biotin ligase at the lysine residue adjacent to X6; (ii) biotinylating said peptide of the fusion protein at the lysine residue adjacent X6; (iii) isolating the biotinylated fusion protein; (iv) applying the biotinylated fusion protein to an avidin or streptavidin coated non-porous support; (v) forming an array of at least three different proteins on the support by either (a) where the fusion protein comprises an antigen, carrying out steps (i) to (iv) the desired number of times to form an antigen array; or (b) where the fusion protein comprises an antibody binding protein, applying to said protein, either prior to or after step (iv) a plurality of different antibodies or binding fragments thereof.
L'invention concerne un procédé permettant de former des jeux ordonnés de protéines sélectionnées parmi des antigènes ou des anticorps. Ce procédé comprend les étapes consistant à : (i) exprimer dans une cellule recombinée une protéine hybride qui comprend soit (a) un antigène, soit (b) une protéine liant les anticorps, hybridée avec un peptide pouvant comprendre jusqu'à 50 acides aminés, ce peptide comprenant la séquence d'acides aminées de SEQ ID NO 1 LX¿1?X¿2?IX¿3?X¿4?X¿5?X¿6?KX¿7?X¿8?X¿9?X¿10? (SEQ ID NO 1) dans laquelle X¿1? est un acide aminé naturel, X¿2? est un acide aminé naturel autre que la leucine, la valine, l'isoleucine, le tryptophane, la phénylalanine ou la tyrosine, X¿3? est la phénylalanine ou la leucine, X¿4? est la glutamine ou l'asparagine, X¿5? est l'alanine, la glycine, la sérine ou la thréonine, X¿6? est la glycine ou la méthionine, X¿7? est l'isoleucine, la méthionine ou la valine, X¿8? est la glutamine, la leucine, la valine, la tyrosine or l'isoleucine, X¿9? est le tryptophane, la tyrosine, la valine, la phénylalanine, la leucine ou l'isoleucine et X¿10? représente un acide aminé naturel quelconque autre que l'asparagine ou la glutamine, ledit peptide pouvant être biotinylé par une biotine ligase au niveau du résidu lysine adjacent à X¿6?; (ii) biotinyler ledit peptide de la protéine hybride au niveau du résidu lysine adjacent à X¿6?; (iii) isoler la protéine hybride biotinylée; (iv) appliquer la protéine hybride biotinylée sur un support non poreux recouvert d'avidine ou de streptavidine, (v) former un jeu ordonné d'au moins trois protéines différentes sur le support en appliquant des techniques suivantes : (a) lorsque la protéine hybride comprend un antigène, on met en oeuvre les étapes (i) à (iv) en les répétant selon les besoins afin de former un jeu ordonné d'antigènes, ou (b) lorsque la protéine hybride comprend une protéine de liaison d'anticorps, on met en contact ladite protéine, soit avant soit après l'étape (iv) une pluralité d'anticorps différents ou de fragments de liaison de ceux-ci.
Bereskin & Parr Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
Nextgen Sciences Ltd.
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