Protein fragment complementation assays for high-throughput...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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C12Q 1/00 (2006.01) C07K 14/00 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2514843

The present invention provides protein fragment complementation assays for drug discovery

La présente invention a trait aux dosages de complémentation de fragments protéiques pour la découverte de médicaments, notamment pour l'identification de composés d'activation ou d'inhibition de voies cellulaires. Sur la base de la sélection d'une paire de protéines interactives en combinaison avec un gène rapporteur approprié de dosage de complémentation de fragments protéiques, les dosages peuvent être réalisés en mode à haut rendement et contenu élevé et peuvent être utilisés dans le criblage de bibliothèques de composés. La paire interactive peut être choisie par le criblage de bibliothèques d'ADNc ; par la cartographie d'interaction génique entre gènes individuels ; ou par la connaissance préalable d'une voie. Des dosages fluorescents et luminescents peuvent être construits au moyen des procédés de l'invention. La sélection de gènes rapporteurs appropriés de dosage de complémentation de fragments protéiques pour des formats de dosage à haute rendement et à contenu élevé (contexte élevé) est proposée pour une variété de gènes rapporteurs, des détails particulier étant fournis pour des exemples d'enzymes monomériques et de protéines fluorescentes. L'invention décrit des procédés de construction de tels dosages pour une ou plusieurs étapes dans une voie biochimique ; l'essai des effets de composés à partir de bibliothèques combinatoires, de produits naturels, de peptides, d'anticorps, d'acides nucléiques ou d'autres sur la protéine ou une/des voie(s) d'intérêt ; et l'utilisation des résultats du criblage pour l'identification de composés spécifiques qui activent ou inhibent la protéine ou la/les voie(s) d'intérêt. L'invention décrit des dosages à couleur unique ou multicolores. L'invention a également trait à des vecteurs d'expression universels avec des cassettes qui permettent la construction rapide de dosages pour une grand nombre diversifié de combinaisons de gènes/rapporteurs. Le développement de tels dosages est démontré comme étant simple, et fournissant une plate-forme large, flexible de pertinence biologique pour la découverte de médicaments.

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