C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12Q 1/02 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01) C07K 19/00 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01)
Patent
CA 2632289
The invention provides a protein labeling and interaction detection system based on engineered fragments of fluorescent and chromophoric proteins that require fused interacting polypeptides to drive the association of the fragments, and further are soluble and stable, and do not change the solubility of polypeptides to which they are fused. In one embodiment, a test protein X is fused to a sixteen amino acid fragment of GFP (.beta.-strand 10, amino acids 198-214), engineered to not perturb fusion protein solubility. A second test protein Y is fused to a sixteen amino acid fragment of GFP (.beta.- strand 11, amino acids 215-230), engineered to not perturb fusion protein solubility. When X and Y interact, they bring the GFP strands into proximity, and are detected by complementation with a third GFP fragment consisting of GPF amino acids 1-198 (strands 1-9). When GFP strands 10 and 11 are held together by interaction of protein X and Y, they spontaneous association with GFP strands 1-9, resulting in structural complementation, folding, and concomitant GFP fluorescence.
L'invention concerne un système de marquage de protéines et de détection d'interactions basé sur des fragments mis au point par génie génétique de protéines fluorescentes et chromophores qui requièrent des polypeptides d'interaction fusionnés pour réguler l'association des fragments, qui sont solubles et stables et qui ne modifient pas la solubilité des polypeptides auxquels elles sont fusionnées. Dans un mode de réalisation, une protéine de test X est fusionnée à un fragment à 16 acides aminés de GFP (brin .beta. 10, acides aminés 198-214) mis au point de façon à ne pas perturber la solubilité des protéines hybrides. Une seconde protéine de test Y est fusionnée à un fragment à seize acides aminés de GFP (brin .beta. 11, acides aminés 215-230) mis au point de façon à ne pas perturber la solubilité des protéines hybrides. Lorsque X et Y interagissent, les brins de GFP sont rapprochés et les protéines sont détectées par complémentation avec un troisième fragment de GFP constitué par les acides aminés de GFP 1-198 (brins 1-9). Lorsque les brins de GFP 10 et 11 sont maintenus ensemble par interaction des protéines X et Y, ils s'associent spontanément aux brins de GFP 1-9, d'où l'obtention d'une complémentation structurale, d'un repliement et d'une fluorescence GFP concomitante.
Cabantous Stephanie
Waldo Geoffrey S.
Los Alamos National Security Llc
Sim & Mcburney
The Regents Of The University Of California Los Alamos National
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1640286