C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/25 (2006.01) C07K 14/00 (2006.01)
Patent
CA 2638888
The invention provides protein subcellular localization assays using split fluorescent protein systems. The assays are conducted in living cells, do not require fixation and washing steps inherent in existing immunostaining and related techniques, and permit rapid, non-invasive, direct visualization of protein localization in living cells. The split fluorescent protein systems used in the practice of the invention generally comprise two or more self- complementing fragments of a fluorescent protein, such as GFP, wherein one or more of the fragments correspond to one or more beta-strand microdomains and are used to ~tag~ proteins of interest, and a complementary ~assay~ fragment of the fluorescent protein. Either or both of the fragments may be functionalized with a subcellular targeting sequence enabling it to be expressed in or directed to a particular subcellular compartment (i.e., the nucleus).
L'invention porte sur des bioessais de localisation d'éléments subcellulaires de protéines utilisant des systèmes de protéines fluorescentes scindées, s'effectuant sur des cellules vivantes et ne nécessitant pas les étapes de fixation et de lavage des procédures actuelles d'immunocoloration et des techniques associées, et permettant une visualisation rapide, non invasive et directe de l'emplacement de protéines dans des cellules vivantes. Les systèmes de protéines scindées utilisées dans la pratique de l'invention comportent d'une manière générale; au moins deux fragments autocomplémentaires d'une protéine fluorescente telle qu'une GPF dont l'un au moins correspond à au moins un microdomaine du brin bêta et sert à marquer les protéines d'intérêt, ainsi qu'un fragment complémentaire de "bio-essai" de la protéine fluorescente. L'un des fragments ou les deux peuvent être fonctionnalisés par une séquence subcellulaire de ciblage lui permettant de s'exprimer dans ou d'être dirigé vers un compartiment subcellulaire particulier (par exemple le noyau).
Cabantous Stephanie
Waldo Geoffrey S.
Los Alamos National Security Llc
Sim & Mcburney
The Regents Of The University Of California
LandOfFree
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