Purification of a pertussis outer membrane protein

Details Purification of a pertussis outer membrane protein Purification of a pertussis outer membrane protein

C - Chemistry, Metallurgy

07

K

C07K 14/235 (2006.01) A61K 39/10 (2006.01) C07K 1/36 (2006.01) A61K 39/00 (2006.01)

Patent

CA 2079887

Pertactin (formerly 69 kDa protein) is recovered in stable biologically pure form having no detectable adenylate cyclase activity from fermentation broth from the fermentation of Bordetella pertussis as well as from the cells. The broth is processed to selectively remove pertussis toxin (PT) and filamentous haemagglutinin (FHA), the pertactin is precipitated by ammonium sulphate and the precipitate is dissolved in buffer at pH 6.0 to 8.5, the solution then is passed through hydroxyapatite and ion-exchange chromatograph columns before final ultrafiltration. Cells are extracted with urea and the extract ultrafiltered and diafiltered. The pertactin is precipitated from the extract and the precipitate processed as above. In a variation, the broth is contacted with ammonium sulphate to precipitate pertactin, PT and FHA, the precipitate is dissolved and the PT and FHA selectively removed, before the solution is passed to the chromatograph columns.

Récupération de la pertactine (autrefois la protéine 69kDa) sous une forme stable biologiquement pure n'ayant aucune activité adénylate cyclase détectable dans un bouillon de fermentation de Bordetella pertussis, de même que dans les cellules. On traite le bouillon de façon à en extraire sélectivement la toxine pertussique (PTX) et l'hémagglutinine filamenteuse (FHA); la pertactine est précipitée au sulfate d'ammonium, et le précipité obtenu est dissous dans un tampon de pH 6,0 à 8.5; la solution est ensuite passée dans des colonnes de chromatographie d'adsorption sur hydroxyapatite et d'échange d'ions avant une ultrafiltration finale. Les cellules sont extraites avec de l'urée, et l'extrait obtenu est ultrafiltré et diafiltré. La pertactine de l'extrait est précipitée, et le précipité est traité tel que décrit ci-dessus. Dans une autre version, on met le bouillon en contact avec du sulfate d'ammonium pour en précipiter la pertactine, PTX et FHA, puis le précipité est dissous et PTX et FHA sélectivement extraits avant que la solution soit passée dans des colonnes de chromatographie.

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