C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
P
C12P 19/04 (2006.01) A61K 31/715 (2006.01) A61P 31/04 (2006.01)
Patent
CA 2665169
The present invention provides improved methods for the reduction or removal of protein impurities from a complex cellular Streptococcus pneumoniae lysate or centrate comprising serotype 3 polysaccharides involving steps relating to post-lysis heating or pH adjustment. In certain methods, the lysate is heated for a time and at a temperature sufficient to denature proteins present in the lysate and cause their aggregation and precipitation. In one embodiment, the lysate is heated to at least 60°C for at least 30 minutes to cause protein aggregation and precipitation, more particularly about 60°C to about 70°C for about 30 to about 50 minutes, and even more particularly about 65°C for about 40 minutes. In other methods, the pH of the lysate or centrate is increased to at least 8.0 to improve filterability, more particularly about 8.0 to 8.4, and even more particularly about 8.2. In further methods, heating and pH adjustment steps are combined to cause the aggregation and precipitation of proteins as well as to improve filterability of the lysates or centrates. In other methods, the pH of the lysate or centrate is lowered to about 3.0 to about 5.0 to cause protein aggregation and precipitation. Such methods allow for the production of substantially purified serotype 3 polysaccharide-containing lysates or centrates.
La présente invention concerne des procédés améliorés pour la réduction ou l'élimination d'impuretés protéiques d'un lysat ou concentré cellulaire complexe de Streptococcus pneumoniae comprenant des polysaccharides du sérotype 3, comprenant les étapes consistant à chauffer ou ajuster le pH après la lyse. Dans certains procédés, le lysat est chauffé pendant une durée et à une température suffisantes pour dénaturer les protéines présentes dans le lysat et provoquer l'agrégation et la précipitation de celles-ci. Dans un mode de réalisation, le lysat est chauffé à au moins 60°C pendant au moins 30 minutes pour provoquer l'agrégation et la précipitation des protéines, plus particulièrement à une température d'environ 60°C à environ 70°C pendant environ 30 à environ 50 minutes et encore plus particulièrement à environ 65°C pendant environ 40 minutes. Dans d'autres procédés, le pH du lysat ou concentré est augmenté à au moins 8,0 pour améliorer la filtrabilité, plus particulièrement à un pH d'environ 8,0 à 8,4 et encore plus particulièrement à environ 8,2. Dans encore d'autres procédés, les étapes de chauffage et d'ajustement du pH sont combinées pour provoquer l'agrégation et la précipitation des protéines ainsi que pour améliorer la filtrabilité des lysats ou concentrés. Dans d'autres procédés, le pH du lysat ou du concentré est abaissé à un pH d'environ 3,0 à environ 5,0 pour provoquer l'agrégation et la précipitation des protéines. De tels procédés permettent la production de lysats ou concentrés contenant des polysaccharides du sérotype 3 extrêmement purifiés.
Bahler Brian Douglas
Hughes Erik Heller
Lee Tsu-Shun
Torys Llp
Wyeth
LandOfFree
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