C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 7/02 (2006.01)
Patent
CA 2648792
Novel purification processes for obtaining vesicular stomatitis virus (VSV) of improved purity from mammalian cell culture are described herein. More particularly, in certain embodiments, a process is described for purifying VSV from cell culture fluid of a mammalian cell culture infected with VSV, the process comprising: clarifying the cell culture fluid by low-speed centrifugation and recovering the VSV in the supernatant; filtering the supernatant through a 0.2 to 0.45 µm filter and recovering the VSV in the filtered solution; loading the VSV filtered solution onto a anion exchange membrane adsorber equilibrated with a first pH buffered salt solution, eluting the VSV from the anion exchange membrane adsorber with a second pH buffered salt solution and recovering the eluted VSV fractions; purifying the recovered VSV by tangential flow filtration (TFF) using a TFF membrane having a molecular weight cutoff between 300 kDa and 1,000 kDa and recovering the VSV in the retentate, and filtering the VSV retentate through a 0.2 to 0.22 µm filter and recovering the VSV in the filtered solution.
L'invention se rapporte à de nouveaux procédé de purification pour l'obtention d'un virus de la stomatite vésiculaire (VSV) d'une pureté accrue à partir d'une culture de cellules de mammifère. Elle concerne plus particulièrement, dans certains modes de mise en oeuvre, un procédé pour purifier le VSV dans le fluide de culture d'une culture de cellules de mammifère infectée avec le VSV. Ce procédé consiste à clarifier le fluide de culture cellulaire au moyen d'une centrifugation à faible vitesse et à récupérer les VSV dans le surnageant, à filtrer la surnageant à travers un filtre de 0,2 to 0,45 µm et à récupérer les VSV dans la solution filtrée, à introduire la solution filtrée de VSV dans un adsorbeur à membrane échangeuse d'anions équilibré à l'aide d'une première solution saline tamponnée, à éluer le VSV provenant de l'adsorbeur à membrane échangeuse d'anions au moyen d'une seconde solution saline tamponnée et à récupérer les fractions de VSV éluées, à purifier les VSV récupérés au moyen d'une filtration tangentielle (TFF) en utilisant une membrane de TFF d'un poids moléculaire nominal limite compris entre 300 kDa et 1 000 kDa et à récupérer les VSV dans le rétentat, puis à filtrer le rétentat de VSV à travers un filtre de 0,2 à 0,22 µm et à récupérer les VSV dans la solution filtrée.
Cutler Mark William
Kang Yun
Ouattara Amadou Affrey
Syvertsen Kristen Elissa
Smart & Biggar
Wyeth
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1632015