Purified insulin mediators and purification process for same

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C - Chemistry, Metallurgy

07

K

C07K 14/625 (2006.01) C07K 1/18 (2006.01) C07K 1/36 (2006.01) C07K 14/47 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)

Patent

CA 2047685

A method for purifying two distinct insulin mediators to substantial homogeneity, and relative purity values above 80%, comprises adsorption on first anion exchange resin and subsequently on a chelex cation exchange resin column. The chelex resin ion exchange column substantially increases the activity of the recovered mediator. Following purification, the already treated fraction is subjected to three successive thin layer chromatography purification steps, the fast giving, in the presence of ninhydrin stain, a characteristic salmon-color spot, which is indicative of the presence of the mediator. This process can also be used as a screening process; the absence of the salmon-colored spot being indicative of the diabetic state. Structure information on the insulin mediators obtained is given.

Procédé de purification de deux médiateurs d'insuline différents jusqu'à des valeurs d'homogénéité et de pureté relative supérieures à 80 %, le procédé comprenant l'adsorption sur une première résine échangeuse d'anions puis sur une colonne de résine échangeuse de cations chelex. La colonne échangeuse d'ions de résine chelex augmente sensiblement l'activité du médiateur récupéré. Après purification, la fraction déjà traitée est soumise à trois étapes successives de purification par chromatographie à couches minces, la dernière étape donnant, en présence de ninhydrine une tache caractéristique de couleur saumon qui indique la présence du médiateur. Ce procédé peut également être utilisé comme procédé de détection, l'absence de la tache de couleur saumon étant d'une indication de l'état diabétique. Des informations de structure concernant les médiateurs d'insuline obtenus sont données.

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