Quantification of nucleic acids and proteins using...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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Details

C12Q 1/68 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01)

Patent

CA 2609328

The invention provides a method for detecting and quantifying the amount of target molecules, such as nucleic acids or proteins in a sample. The target molecules are first recognized and bounded by target-specific probes, generally nucleic acids or proteins that bind specifically to the targets, each of which is labeled with a short single-stranded nucleic acid probe, either DNA or RNA, with distinct molecular weight. This label is called an oligonucleotide mass tag. One or several standard oligonucleotide sequences can be designed with similar sequence but distinct molecular weight to those oligonucleotide mass tags. Then the oligonucleotide mass tags associated with bounded probes and the standard sequences are co-amplified using a pair of common primers. The presence and/or amount of each oligonucleotide mass tag, which corresponds to the amount of corresponding target molecule, is determined by a primer extension reaction and quantification of the primer extension product.

L'invention concerne une méthode servant à détecter et à quantifier la quantité de molécules ciblées, telles que des acides nucléiques ou des protéines, dans un spécimen. Ceci consiste d'abord à reconnaître les molécules ciblées et à les lier à des sondes spécifiques, en général, des acides nucléiques ou des protéines qui se lient aux cibles de façon spécifique, chacune étant marquée par une sonde d'acides nucléiques courte monocaténaire, soit ADN, soit ARN, présentant un poids moléculaire distinct. Cette étiquette est désignée étiquette de masse d'oligonucléotides. Une ou plusieurs séquences d'oligonucléotides standards peuvent être conçues avec une séquence analogue mais un poids moléculaire distinct par rapport à ces étiquettes de masse d'oligonucléotides. Ces dernières associées aux sondes liées et aux séquences standards sont co-amplifiées au moyen d'une paire d'amorces communes. La présence et/ou la quantité de chaque étiquette de masse d'oligonucléotides correspondant à la quantité de molécules ciblées relatives, est déterminée par une réaction d'extension d'amorce et par quantification du produit de cette réaction.

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