C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2325343
A method is provided for determining the level of expression of a gene of interest, or panel of genes of interest, in a biological sample. The method involves preparing a standard curve for each gene of interest by assaying a dilution series prepared from a total RNA in a reverse transcriptase-5'- exonuclease PCR amplification assay. A threshold cycle (Ct) for each member of the reverse transcribed-amplified is determined and plotted versus the log of the amount of total RNA in dilution series. The plot is used to determine an RNA equivalent from which the normalized RNA equivalent for the gene of interest in the sample is determined. The assay can be used to determine the effect of a treatment of the sample on the level of expression of a gene or interest or panel of genes of interest.
L'invention concerne un procédé servant à déterminer le niveau d'expression d'un gène intéressant, ou d'un groupe de gènes intéressants, dans un échantillon biologique. Le procédé comporte la préparation d'une courbe normalisée pour chaque gène intéressant, mise en oeuvre par le dosage d'une série de dilutions préparées à partir d'ARN complet dans un test d'amplification par PCR de 5'-exonucléase à la transcriptase inverse. Un cycle de seuil (Ct) pour chaque élément de la série transcrite inverse - amplifiée est déterminé et tracé par opposition au relevé de la quantité d'ARN complet de la série de dilutions. Le tracé est utilisé pour déterminer un ARN équivalent à partir duquel on détermine l'ARN normalisé équivalent du gène intéressant de l'échantillon. Le dosage peut être utilisé pour déterminer l'effet d'un traitement de l'échantillon sur le niveau d'expression d'un gène intéressant ou d'un groupe de gènes intéressants.
Lowe David G.
Schoenfeld Jill R.
Dennison Associates
Genentech Inc.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1954977