C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) B01L 99/00 (2010.01) C07H 21/04 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)
Patent
CA 2478020
An adaptation of the real-time PCR assay allows for highly sensitive detection of any eubacterial species with simultaneous speciation. The assay relies on a 'multiprobe' design in which a single set of highly conserved sequences encoded by the 16S rRNA gene serves as the primer pair, and it is used in combination with both an internal highly conserved sequence, the universal probe, and an internal variable region, the species-specific probe. A pre-PCR ultrafiltration step can be used to effectively decontaminate or remove background DNA. The real-time system reliably identifies 14 common bacterial species with a detection limit of 50 fg. Figure 5 depicts the design of primers and probes for the assay.
Selon cette invention, une adaptation de l'analyse de l'amplification en chaîne par polymérase (PCR) en temps réel permet une détection hautement sensible de toute espèce eubactérienne avec spéciation simultanée. Cette analyse repose sur une conception de <=multisonde>= dans laquelle un unique ensemble de séquences hautementconservées codées par le gène ARNr 16S sert de paire primaire, et est utilisée avec à la fois une séquence interne hautement conservée, la sonde universelle, et une région interne variable, la sonde propre à l'espèce. Une étape d'ultrafiltration précédent la PCR peut être utilisée pour décontaminer ou éliminer efficacement l'ADN résiduel. Ce système en temps réel identifie de manière fiable 14 espèces bactériennes communes avec une limite de détection de 50 fg.
Kelen Gabor David
Lin Shin
Rothman Richard Eric
Yang Samuel
The Johns Hopkins University
Torys Llp
LandOfFree
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