C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/81 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)
Patent
CA 2394805
A method for identifying a mutation-sensitive active region of a test protein, by providing a test nucleic acid construct comprising a regulatable promoter polynucleotide and a fusion polynucleotide comprising a test polynucleotide encoding the test protein fused to a reporter gene, wherein said fusion polynucleotide is operably associated with the promoter polynucleotide, wherein expression of the fusion polynucleotide in a selected host cell results in a specific phenotype and the presence of the reporter; mutagenizing the test nucleic acid construct to provide a mutagenized construct; transforming a selected host cell with the mutagenized construct to provide a transformed host cell; selecting a transformed host cell that exhibits the reporter, but which does not exhibit the specific phenotype; and sequencing a portion of the mutagenized construct from the selected transformed host cell to determine the alteration of the polynucleotide(s). The sequenced polynucleotides will exhibit alterations in one or more critical regions.
L'invention concerne un procédé permettant d'identifier une région active sensible à la mutation d'une protéine test par la fourniture d'une séquence d'acide nucléique test consistant en un polynucléotide promoteur régulable et un polynucléotide de fusion comprenant un polynucléotide test codant la protéine test fusionnée à un gène rapporteur. Ledit polynucléotide de fusion est fonctionnellement associé au polynucléotide promoteur, l'expression du polynucléotide de fusion dans une cellule hôte choisie donnant lieu à un phénotype spécifique et la présence du rapporteur. La mutagenèse de la séquence d'acide nucléique test permet de produire une séquence mutagène. La transformation d'une cellule hôte choisie avec la séquence mutagène permet de produire une cellule hôte transformée. On sélectionne une cellule hôte transformée qui présente le rapporteur, mais qui ne présente pas le phénotype spécifique. Enfin, le séquençage d'une partie de la séquence mutagène, à partir de la cellule hôte transformée choisie, permet de déterminer la modification du (des) polynucléotide(s). Les polynucléotides séquencés présenteront des modifications dans au moins une région critique.
Rebelo Do Couto Fernando J.
Tugendreich Stuart
Gowling Lafleur Henderson Llp
Iconix Pharmaceuticals Inc
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2004374