G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/554 (2006.01) G01N 33/569 (2006.01)
Patent
CA 2250911
A rapid assay for infection in immunodeficient patients such as neonates (newborn infants) or immunocompromised patients (e.g. HIV or transplant patients) is used in diagnosis at initial evaluation, such that antibiotic treatment and confinement to an intensive care unit are avoided for uninfected patients. The assay can be used for detecting bacterial, viral, or fungal colonization of the blood stream, cerebrospinal fluid (CSF), or urinary tract. The method is particularly suited for sepsis diagnosis. Polymorphonuclear leukocyte (PMN, neutrophil) CD11b (Mac-1, CR3) levels are measured by flow cytometry or laser scanning microscopy in low volume (0.1 ml) whole blood samples. A dual-laser FACS identifies neutrophils by FITC-conjugated anti-CD15 fluorescent antibodies, and identifies surface neutrophil CD11b marked with PE- conjugated anti-CD11b antibodies. Spontaneous upregulation of CD11b is prevented by handling samples at 4 ~C or adding a stabilizing compound such as anti-CD14 antibody or adenosine to the samples. A kit comprises calibration markers such as CD11b-coated microspheres for calibrating the device used for analysis according to diagnosis threshold(s), as well as fluorescent anti- CD11b and anti-CD15 antibodies.
L'invention porte sur un dosage rapide permettant de diagnostiquer une infection chez des patients immunodéficients, des nouveau-nés, notamment, ou des patients immunodéprimés (patients atteints par le virus de l'immunodéficience humaine ou malades à greffer). Ce dosage est utilisé à des fins diagnostiques au stade de l'évaluation primaire, de sorte que l'on évite un traitement par antibiotiques et un confinement dans un service de soins intensifs à des patients sains. On peut utiliser ce dosage pour déceler une colonisation bactérienne, virale ou fongique dans la circulation sanguine, le liquide céphalo-rachidien (LCR) ou le tractus urinaire. Cette technique est particulièrement adaptée aux fins d'un diagnostic de septicémie. On mesure les teneurs en CD11b (Mac-1, CR3) des leucocytes polynucléaires (polynucléaire, neutrophile), par cytométrie de flux ou microscopie laser à balayage dans de faibles volumes (0,1 ml) d'échantillons de sang complet. Un laser double trieur de cellules à fluorescence (FACS) identifie les neutrophiles au moyen d'anticorps anti-CD15 fluorescents conjugués avec de l'isothiocyanate de fluorescéine (FITC) et identifie le marqueur CD11b pour les neutrophiles en surface, marqué au moyen d'anticorps anti-CD11b conjugués avec PE . On empêche une régulation positive spontanée de CD11b en manipulant les prélèvements à 4 ·C ou en ajoutant aux échantillons un composé stabilisateur tel qu'un anticorps anti-CD14 ou de l'adénosine. Un nécessaire comprend des marqueurs d'étalonnage tels que des microsphères enrobées de CD11b afin d'étalonner le dispositif utilisé pour l'analyse en fonction du ou des seuils diagnostiques, ainsi que des anticorps fluorescents anti-CD11b et anti-CD15.
Benitz William E.
Herzenberg Leonard A.
Herzenberg Leonore A.
Maldonado Yvonne
Rabin Ronald L.
Dennison Associates
The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University
LandOfFree
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