C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 5/0783 (2010.01) C12N 15/86 (2006.01) C12N 15/87 (2006.01)
Patent
CA 2198633
The present invention provides a rapid expansion method (termed 'REM"), for quickly generating large numbers of T lymphocytes, including cytolytic and helper T lymphocytes. REM involves culturing the T cells in association with a disproportionately large concentration of nondividing feeder cells, preferably .gamma.-irradiated peripheral blood mononuclear cells ('PBMC") present at an excess of at least 40-fold (relative to the number of target T cells), more preferably at an excess of at least about 200-fold. Cultures grown under REM exhibit dramatically enhanced expansion rates that can be even further elevated by the use of appropriate concentrations of an additional feeder cell, an anti-CD3 monoclonal antibody and IL-2, as described herein. Clonal expansions in the range of 500-fold to 3000-fold can be achieved within a single stimulation cycle of about 10 -13 days, which is more than 100- fold more efficient than currently employed methods of culturing human T cell clones. Genetic transduction efficiencies were also enhanced using REM-expanded T lymphocytes. Several examples involving human bone narrow transplant recipients illustrate the effective use of REM-expanded antigen-specific cytotoxic T lymphocytes for adoptive immunotherapy in humans.
L'invention porte sur un procédé de développement rapide (dénommé "REM") permettant de produire rapidement des grands nombres lymphocytes T, y compris des lymphocytes T auxiliaires et des lymphocytes T cytolytiques. Le procédé REM consiste à mettre en culture les lymphocytes T en les associant à une forte concentration disproportionnée de cellules nourricières ne se divisant pas, de préférence des cellules mononucléaires du sang périphérique irradiées aux rayons gamma ("PBMC") dont le nombre est au moins 40 fois supérieur (par rapport au nombre de lymphocytes T cibles), de préférence au moins environ 200 fois supérieur. Les mises en culture selon le procédé REM présentent des taux de développement dont l'amélioration est spectaculaire et qui peuvent être accrus encore plus en utilisant une celulle nourricière supplémentaire, un anticorps monoclonal anti-CD3 et une interleukine-2 dans des concentrations adéquates, tel que cela est décrit dans la demande ci-jointe. En l'espace d'un seul cycle de stimulation d'environ 10 à 13 jours, il est possible d'obtenir une multiplication par 500 à 3000 des développements clonaux, ce qui équivaut à une efficacité plus que cent fois supérieure aux procédés actuels de mise en culture de clones de lymphocytes T humains. Le recours à des lymphocytes T développés selon le procédé REM a premis d'améliorer également les rendements de transduction génétique. L'utilité des lymphocytes T cytotoxiques à antigènes spécifiques développés par procédé REM pour l'immunothérapie adoptive chez l'homme est illustrée pour de nombreux exemples portant sur des greffés de la moelle osseuse.
Greenberg Philip D.
Riddell Stanley R.
Borden Ladner Gervais Llp
Fred Hutchinson Cancer Research Center
LandOfFree
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