Reagents and a method for saturation labelling of proteins

C - Chemistry – Metallurgy – 09 – B

Patent

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Details

C09B 67/22 (2006.01) C07K 1/13 (2006.01) C09B 23/02 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)

Patent

CA 2491692

A matched set of fluorescent dyes is provided, wherein each dye of the set is capable ofcovalent attachment to a protein and wherein each of the dyes has a molecular structure and a charge that is matched one with the other, such that relative electrophoretic mobility of a protein labelled with one dye of the set is the same as the electrophoretic mobility of the protein labelled with a different dye of the set. The matched set comprises at least two different fluorescent dyes of formula:wherein n is 1, 2, or 3; Z1 and Z2 independently represent the carbon atoms necessary to complete a phenyl or naphthyl ring system; one of groups R1 and R2 is a target bonding group; remaining group R1 or R2 is selected from -(CH2)4-W or -(CH2)r-H; group R3 is hydrogen, except when either R1 or R2 is -(CH2)r-H, in which case R3 is W; and W is selected from sulphonic acid and sulphonate. The invention also provides a method for saturation labelling of a protein with a fluorescent dye so as to label all available target amino acid, suitably cysteine, residues in the protein, thereby giving a single population of labelled protein molecules.

L'invention concerne un ensemble de colorants fluorescents appariés, chaque colorant de l'ensemble pouvant se fixer de manière covalente sur une protéine. Chaque colorant présente une structure et une charge moléculaire adaptées les unes aux autres, de sorte que la mobilité électrophorétique relative d'une protéine marquée avec un colorant de l'ensemble est la même que la mobilité électrophorétique d'une protéine marquée avec un colorant différent de l'ensemble. Ledit ensemble apparié comprend au moins deux colorants fluorescents différents de formule (I), dans laquelle n représente 1, 2 ou 3 ; Z?1¿ et Z?2¿ représentent indépendamment l'un de l'autre les atomes de carbone nécessaires pour terminer un système de cycle phényle ou naphtyle ; un des groupes R?1¿ et R?2¿ est un groupe de liaison cible ; le groupe restant R?1¿ ou R?2¿ est sélectionné parmi -(CH¿2?)¿4?-W ou -(CH¿2?)¿r?-H ; le groupe R?3¿ représente W ; et W est sélectionné parmi l'acide sulfonique et les sulphonates. L'invention concerne également un procédé de marquage par saturation d'une protéine au moyen d'un colorant fluorescent, de façon à marquer tous les aminoacides cibles disponibles, la cystéine, des résidus dans la protéine, tout en donnant une population simple de molécules à protéines marquées.

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