G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/566 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01)
Patent
CA 2166871
Methods are provided for assaying the function (e.g., activation) of signal-transducing receptors on cells. The methods are useful for identifying compounds that are agonists or antagonists of receptor function. The assays utilize a two-antibody sandwich assay employing an immobilized first antibody that specifically binds and captures the receptor of interest along with any tightly associated proteins or polypeptides and a second antibody directed against (i) an epitope of the receptor that is characteristic of the activated but not the unactivated state, (ii) an epitope of a protein or molecule characteristic bound to activated receptor but not to unactivated receptor, or (iii) an epitope of the receptor that is characteristic of the unactivated but not the activated state. In one embodiment, the level of binding of the second antibody is determined and correlated with the presence of activated receptor, and thus with activation in response to the treatment received by the cells. The methods provided by the invention will find particular use for detecting activation of tyrosine kinase growth factor receptors.
L'invention concerne des procédés de détermination de la fonction (par exemple, l'activation) de récepteurs transducteurs de signaux sur des cellules. Les procédés sont efficaces pour l'identification de composés agonistes ou antagonistes de la fonction du récepteur. Ils mettent en application une méthode de détermination sandwich à deux anticorps utilisant un premier anticorps immobilisé qui se fixe au récepteur et le capture avec les polypeptides et protéines étroitement associés et un deuxième anticorps dirigé contre (i) un déterminant antigénique du récepteur caractéristique de l'état activé mais non de l'état inactivé, (ii) un déterminant antigénique d'une protéine ou d'une molécule fixée caractéristiquement au récepteur activé mais pas au récepteur inactivé ou (iii) un déterminant antigénique du récepteur caractéristique de l'état inactivé mais non de l'état activé. Dans un mode de réalisation, le niveau de fixation du deuxième anticorps est déterminé et mis en corrélation avec la présence du récepteur activé et, de ce fait, avec l'activation en réponse au traitement reçu par les cellules. Les procédés décrits par l'invention sont particulièrement efficaces pour détecter l'activation des récepteurs du facteur de croissance de tyrosine kinase.
Bereskin & Parr Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
Cor Therapeutics Inc.
Millennium Pharmaceuticals Inc.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1409696