C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/67 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/82 (2006.01) C12N 15/83 (2006.01)
Patent
CA 2292897
The present inventions focuses on the super-expression of foreign genes in transgenic cells by combining within a single cDNA construct and respective RNA transcript, several trans- and cis-acting genetic elements of viral origin which will act in concert to trigger the following functional events: a) the primary chimeric continuous RNA transcript is produced by the transformed cells from plant-expressible promoter (35S promoter); b) RNA replicase produced by direct translation of the 5'-proximal gene of a single continuous primary transcript will synthesize secondary monocistronic (or dicistronic) mRNA as a result of the transcription from sgPr sequence. Expression of the 5'-proximal gene of these mRNAs will be enhanced by the .alpha..beta.-leader. Translation of the 5'-distal gene of dicistronic mRNA will be promoted by internal ribosome entry site (IRES) sequence derived from crTMV tobamovirus mentioned above; c) it is probable that at least part of RNA transcripts originated from sgPr will include at their 3'-end the minus copy of RNA replicase gene and genomic promoter for plus-RNA synthesis. It can be expected that RNA replicase produced in transgenic cell will bind with the 3'-terminal sequence of this RNA (genomic promoter) producing upon transcription the RNA molecules carrying the plus-polarity replicase gene at the 5'-end. Translation of these mRNAs will result in production of additional replicase in transgenic plant.
L'invention concerne la super-expression de gènes étrangers dans des cellules trangéniques par la combinaison, dans une seule construction d'ADNc et un transcrit d'ARN respectif, de plusieurs éléments génétiques agissant en trans- et cis- d'origine virale qui agiront de concert pour déclencher les événements fonctionnels suivants: a) le transcrit d'ARN primaire chimère continu est produit par les cellules transformées à partir d'un promoteur susceptible d'être exprimé par les plantes (promoteur 35S); b) l'ARN réplicase produite par traduction directe du gène 5`-proximal d'un transcrit simple primaire continu va synthétiser un ARN messager secondaire monocistronique (ou dicistronique) comme résultat de la transcription à partir de la séquence sgPr. L'expression du gène 5`-proximal de ces ARN messagers sera amélioré par le alpha beta -leader. La traduction du gène 5`-distal de l'ARN messager dicistronique sera favorisée par la séquence du site d'entrée ribosomique interne (IRES) dérivée du tobamovirus crTMV précité; c) il se peut qu'au moins une partie des transcrits d'ARN obtenus à partir de la séquence sgPr comprennent au niveau de leur extrémité 3` la copie négative du gène d'ARN réplicase et du promoteur génomique pour une synthèse d'ARN positif. On peut s'attendre à ce que l'ARN réplicase produite dans la cellule transgénique se lie à la séquence terminale 3` de cet ARN (promoteur génomique) produisant lors de la transcription les molécules d'ARN portant le gène réplicase à polarité positive au niveau de l'extrémité 5`. La traduction de ces ARN messagers va produire des réplicases supplémentaires chez les plantes transgéniques.
Atabekov Joseph
Dorokhov Yurii
Korpela Timo
Morozov Sergey
Atabekov Joseph
Dorokhov Yurii
Korpela Timo
Morozov Sergey
Robic
LandOfFree
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