C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 9/12 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/18 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)
Patent
CA 2445819
The present invention relates to a method of producing a functional cell-free hepatitis B virus (HBV) reverse transcriptase (RT) comprising the steps of expressing HBV-RT in E. coli cells employing a suitable expression plasmid, or in a cell-free transcription-translation system and if expression was carried out in E. coli cells, lysing said E. coli cells and purifying HBV-RT from E. coli lysate or from said transcription-translation system. The invention further relates to a method of screening for an inhibitor of HBV-RT activity comprising the steps of contacting the cell-free HBV-RT produced according to methods of the present invention and with a potential inhibitor and assaying whether said potential inhibitor inhibits HBV-RT activity. Furthermore, the invention provides for a method of producing a pharmaceutical composition comprising the step of formulating the inhibitor identified by the screening method of the invention into a pharmaceutical composition.
La présente invention concerne une méthode de production d'une transcriptase inverse fonctionnelle acellulaire du virus de l'hépatite B (VHB), qui consiste à exprimer la VHB-Rtase dans des cellules d'E. coli au moyen d'un plasmide d'expression approprié, ou dans un système de transcription-traduction acellulaire, et, si l'expression est réalisée dans des cellules d'E. coli, à lyser lesdites cellules d'E. coli et à purifier la VHB-Rtase du lysat d'E. coli ou dudit système de transcription-traduction. L'invention concerne également une méthode de criblage destinée à découvrir un inhibiteur de l'activité de VHB-Rtase, qui consiste à placer la VHB-Rtase acellulaire obtenue selon les méthodes de l'invention au contact d'un inhibiteur potentiel, puis à effectuer un dosage biologique afin de déterminer si cet inhibiteur potentiel peut inhiber l'activité de VHB-Rtase. L'invention concerne en outre une méthode de production d'une composition pharmaceutique, qui consiste à formuler dans une composition pharmaceutique l'inhibiteur identifié par la méthode de criblage.
Buchner Johannes
Haslbeck Martin
Muschler Paul
Goudreau Gage Dubuc
Phytrix Ag
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1820734