Recombinant nematode nicotinic receptor and uses

Details Recombinant nematode nicotinic receptor and uses Recombinant nematode nicotinic receptor and uses

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/12 (2006.01) C07K 14/705 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01)

Patent

CA 2376642

The <i>C. elegans unc-63</i> gene is a levamisole resistance locus on chromosome I, which encodes a nicotinic acetylcholine receptor (nAChR) .alpha. subunit. The derived amino acid sequence of UNC-63 most closely resembles that of UNC-38. Using a gfp: <i>unc-63</i> fusion construct, expression has been detected in muscles (body wall, vulval) and motorneurons of <i>C. elegans</i>. Nuclear injection into <i>Xenopus laevis</i> oocytes of <i>unc-63</i> cDNA together with <i>lev-1</i> and <i>unc-29</i> results in the expression of a robust functional <i>C. elegans</i> heteromeric nAChR. The EC50 for ACh of the expressed receptor (20µM) resembles that of native nematode muscle nAChRs. Nicotine and anthelmintic drug levamisole are agonists and mecamylamine is an antagonist of this expressed receptor. When <i>unc-38</i> cDNA is co-injected with cDNAs encoding <i>unc-63</i>, <i>lev-1</i> and <i>unc-29</i> much smaller amplitude agonist-activated currents are observed.

Le gène C. elegans unc-63 est un locus de résistance au lévamisole situé sur le chromosome I codant une sous-unité .alpha. du récepteur nicotinique de l'acétylcholine (nAChR). La séquence d'acides aminés dérivée de UNC-63 ressemble de très près à celle de UNC-38. Lors de l'utilisation d'un produit de recombinaison par fusion gfp::unc-63, on a détecté une expression dans les muscles (paroi corporelle, vulve) et les neurones moteurs de C. elegans. L'injection nucléaire dans les ovocytes Xenopus laevis de l'ADNc unc-63 et de lev-1 et unc-29 provoque l'expression d'un nAChR hétéromérique de C. elegans fonctionnel et robuste. Le EC¿50? de l'Ach du récepteur exprimé (20µM) ressemble à celui des récepteurs nAChR naturels des muscles de nématodes. La nicotine et l'anthelminthique lévamisole sont des agonistes et la mécamylamine est un antagoniste du récepteur exprimé. Lorsqu'on co-injecte l'ADNc unc-38 avec les ADNc codant unc-63, lev-1 et unc-29, on observe des courants activés par agonistes d'une amplitude moindre.

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