Recombination method

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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Details

C12N 15/00 (2006.01)

Patent

CA 2436743

The invention relates to a novel method for altering the sequence of a nucleic acid molecule using repair recombination in a simple one component system. The frequency of the recombination reaction is high, allowing a range of feasible selection strategies to identify successful recombination events. The method involves the steps of bringing a first nucleic acid molecule into contact with a second nucleic acid molecule in the presence of a phage annealing protein into contact with a second nucleic acid molecule in the presence of a phage annealing protein, or a functional equivalent or fragment thereof, wherein said first nucleic acid molecule comprises at least two regions of shared sequence homology with the second nucleic acid molecule, under conditions suitable for repair recombination to occur between said first and second nucleic acid molecules; ad selecting a nucleic acid molecule whose sequence has been altered so as to include sequence from said second nucleic acid molecule.

L'invention concerne un nouveau procédé consistant à altérer la séquence d'une molécule d'acide nucléique par recombinaison réparatrice dans un système simple à un composant. La fréquence de la réaction de recombinaison est élevée, ce qui permet d'identifier des événements de recombinaison réussis par diverses stratégies de sélection possibles. Ledit procédé consiste à mettre en contact une première molécule d'acide nucléique avec une seconde molécule d'acide nucléique en présence d'une protéine d'annelage de phages, ou d'un fragment ou d'un équivalent fonctionnel de celle-ci, la première molécule d'acide nucléique comprenant au moins deux régions d'homologie de séquence partagée avec la seconde molécule d'acide nucléique, dans des conditions favorisant une recombinaison réparatrice entre la première et la seconde molécule d'acide nucléique. Le procédé consiste ensuite à sélectionner une molécule d'acide nucléique dont la séquence a été altérée de façon à inclure la séquence de cette seconde molécule d'acide nucléique.

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