Repair of nucleic acids for improved amplification

Details Repair of nucleic acids for improved amplification Repair of nucleic acids for improved amplification

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 9/00 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2584768

Methods and compositions are provided for repairing apolynucleotide so that it can be synthesized efficiently with improved fidelity and yield in, for example, an amplification reaction. This involves the use of a reaction mixture that includes a ligase and a cofactor selected from NAD+ or ATP and incubating the polynucleotide with the reaction mixture in the absence of Endonuclease VI. The reaction mixture may further contain an AP endonuclease and a polymerase. These enzymes are optionally selected according to their ability to withstand high temperatures so they can be included in an amplification mixture. The reaction mixture may be used prior to a polynucleotide synthesis reaction in which case enzymes that are not thermophilic may be used. The repair reaction is not time sensitive with respect to seconds, minutes or hours of incubation in the enzyme mixture.

L'invention concerne des méthodes et des compositions destinées à réparer un polynucléotide de sorte qu'il puisse être synthétisé efficacement avec une fidélité améliorée et produire, par exemple, une réaction d'amplification. Pour cela, un mélange réactionnel est utilisé, qui comprend une ligase et un cofacteur choisi parmi NAD+ et ATP, et le polynucléotide est incubé avec le mélange réactionnel en l'absence de l'endonucléase VI. Le mélange réactionnel peut en outre contenir une AP endonucléase et une polymérase. Ces enzymes sont éventuellement sélectionnées en fonction de leur capacité à supporter de hautes températures, ce qui permet leur inclusion dans un mélange d'amplification. Le mélange réactionnel peut être utilisé préalablement à la mise en oeuvre d'une réaction de synthèse, auquel cas des enzymes non thermophiles peuvent être utilisées. La réaction de réparation n'est pas tributaire du temps d'incubation dans le mélange enzymatique, qu'il soit exprimé en secondes, en minutes ou en heures.

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