C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/86 (2006.01) A61K 39/12 (2006.01) C07K 14/18 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 7/04 (2006.01)
Patent
CA 2495294
The present invention provides new Pestiviral RNA genomes (replicons) that are able to replicate, and can be packaged into infectious viral particles in cells that complement the missing protein(s), but do not produce infectious progeny virus. Such replicons can be useful for vaccine purposes. The replicons encode most, preferably all, envelop proteins of the virus, while, on the other hand, it would not be capable of producing infectious progeny virus. The present invention provides a Pestiviral replicon, preferably from the Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV), which expresses all structural proteins except for a functional C or E1 protein. Preferably at least part of the coding sequence of the E1 or C protein has been deleted from said replicon. The present inventors proved for the first time, that both C and E1 structural proteins are essential for the formation of infectious pestiviruses. Furthermore it was shown that deletion of C and E1 does not impact the ability of RNA self-replication. By using cell lines constitutively expressing pestiviral structural proteins, Capsid- or E1-proteins can be efficiently trans-complemented. The resulting virions are able to infect bovine target cells and to transfer the replicons without generating replication-competent virus progeny. In other words, no infectious progeny virus is produced. The complemented virions are indistinguishable from wild- type Pestivirus.in virus neutralization experiments. Recombinations yielding infectious wild-type virus were not detected in any of the complementation experiments. The complemented viruses may be used for the safe and efficacious immunization against BVDV.
La présente invention concerne de nouveaux génomes d'ARN pestiviraux (des réplicons) capables de réplication qui peuvent être encapsulés dans des particules virales infectieuses des cellules qui complémentent la ou les protéine(s) manquante(s) mais ne produisent pas de virus de progéniture infectieuse. Ces réplicons codent pour la plupart, de préférence pour la totalité, des protéines d'enveloppe du virus, qui ne sont pas capables de produire des virus de progéniture infectieuse. La présente invention concerne un réplicon pestiviral, de préférence à partir du virus de diarrhée chez les bovidés (BVDV), qui exprime toutes les protéines structurelles à l'exception d'une protéine fonctionnelle C ou E1. De préférence, au moins une partie de la séquence codant pour la protéine E1 ou C a été supprimée dans le réplicon. Dans la présente invention, on a démontré pour la première fois que les protéines structurelles C et E1 ont un rôle de première importance dans la formation des pestivirus infectieux. En outre, on a aussi montré que la suppression de C et de E1 n'influe pas sur la capacité d'auto-réplication d'ARN. En utilisant des lignées cellulaires exprimant par leur constitution des protéines structurelles pestivirales, on peut complémenter efficacement en <i>trans</i> les protéines capsides ou E1. Les virions qui en résultent permettent d'infecter des cellules cibles bovines et de transférer les réplicons sans générer de progéniture virale capable de réplication. En d'autres termes, aucun virus de progéniture infectieuse n'est produit. Les virions complémentés ne se distinguent pas du pestivirus de type sauvage dans les expériences de neutralisation de virus. Aucun virus de type sauvage infectieux capable de recombinaison n'a été détecté lors des expériences de complémentation. Les virus complémentés peuvent s'utiliser pour une immunisation sure et efficace contre BVDV.
Beer Martin
Reimann Ilona
Akzo Nobel N.v.
Fetherstonhaugh & Co.
Intervet International B.v.
LandOfFree
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