C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) C07K 16/00 (2006.01) C12N 15/13 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2291721
The invention provides a method of diplaying nascent proteins or peptides as complexes with eukaryotic ribosomes and the mRNA encoding the protein or peptide following transcription and translation in vitro, of further selecting complexes carrying a particular nascent protein or peptide by means of binding to a ligand, antigen or antibody, and of subsequently recovering the genetic information encoding the protein or peptide from the selected ribosome complex by reverse transcription and polymerase chain reaction (RT-PCR). The RT-PCR recovery step is carried out directly on the intact ribosome complex, without prior dissociation to release the mRNA, thus contributing to maximal efficiency and sensitivity. The steps of display, selection and recovery can be repeated in consecutive cycles. The method is exemplified using single- chain antibody constructs as antibody-ribosome-mRNA complexes (ARMs).
L'invention concerne un procédé servant à développer de nouvelles protéines ou de nouveaux peptides en tant que complexes constitués par des ribosomes eucaryotes et l'ARNm codant cette protéine ou ce peptide suivant la transcription et la traduction in vitro, à continuer d'opérer la sélection de complexes portant une nouvelle protéine ou un nouveau peptide particuliers par l'intermédiaire d'une fixation à un ligand, à un antigène ou à un anticorps et à récupérer ensuite l'information génétique codant la protéine ou le peptide depuis le complexe ribosomique sélectionné par transcription inverse et par amplification en chaîne par polymérase (RT-PCR). On exécute directement cette étape de récupération par RT-PCR sur le complexe ribosomique intact, sans dissociation préalable afin de libérer l'ARN, ce qui contribue à une efficacité et à une sensibilité maximum. On peut recommencer les étapes de développement, de sélection et de récupération dans des cycles consécutifs. Un exemple de ce procédé consiste à utiliser des produits génétiques d'anticorps monocaténaires en tant que complexes anticorps-ribosome-ARNm (ARMs).
He Mingyue
Taussig Michael John
Babraham Institute
Crescendo Biologics Limited
Sim & Mcburney
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1410271