C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) C12Q 1/70 (2006.01)
Patent
CA 2095070
Procédé d'amplification d'ARN, comportant les étapes consistant à dénaturer l'ARN par chauffage d'une solution le contenant, synthétiser un premier brin d'ADNc à partir d'une amorce appropriée en présence d'une transcriptase réverse, dénaturer l'hétéroduplex formé, synthétiser le second brin d'ADNc à partir d'une seconde amorce en présence d'ADN polymérase, puis à soumettre l'ADNc obtenu à des cycles d'amplification en nombre suffisant. Grâce à la découverte que certaines transcriptases réverses non réputées thermostables sont capables, lorsqu'elles sont utilisées en quantité suffisante, de résister à un traitement de dénaturation de l'ARN par la chaleur à une température supérieure ou égale à 60°C, et même de pouvoir fonctionner, après ce traitement, à des températures élevées correspondant à des conditions suffisamment discriminantes, ce procédé est caractérisé par le fait que ladite solution d'ARN contient dès le départ, tous les réactifs et solvants nécessaires auxdites étapes et que l'ensemble des étapes est effectué dans un même conteneur sans ajout de réactifs ou de solvants. Il est ainsi possible d'opérer, dans des conditions satisfaisantes, en une seule étape de manipulations, ce qui évite notamment des risques de contamination. Application notamment au diagnostic des infections bactériennes ou virales, et des désordres génétiques, ainsi qu'au typage cellulaire.
Mallet Francois
Mandrand Bernard
Oriol Guy
Bio Merieux
Robic
LandOfFree
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