Rna polymerases from bacteriophage phi 6-phi 14 and use thereof

Details Rna polymerases from bacteriophage phi 6-phi 14 and use thereof Rna polymerases from bacteriophage phi 6-phi 14 and use thereof

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/54 (2006.01) C12N 9/12 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/40 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) C12Q 1/70 (2006.01)

Patent

CA 2395239

A polymerase protein originating from a dsRNA virus catalyzes RNA synthesis using ssRNA, dsRNA, ssDNA, or dsDNA templates. Such a polymerase can be purified from a dsRNA virus, and a protein having the amino acid sequence of sucha polymerase is useful in methods and kits for in vitro RNA synthesis. A polymerase of the invention is processive, has very high RNA-polymerization rate and does not require primer for the initiation of RNA synthesis, although it is also able to initiate RNA synthesis in the presence of a primer. Primer- independent synthesis is especially useful in amplifying RNA for quantitation of RNA species in the sample and their identification by direct sequencing. This methodology is especially useful in detecting pathogenic parasites and differences in gene expression levels associated with diseases.

L'invention concerne une protéine de polymérase provenant d'un virus d'ARN double brin catalysant la synthèse d'ARN au moyen de matrices d'ARN simple brin, d'ARN double brin, d'ADN simple brin, d'ADN double brin. Cette polymérase peut être purifiée d'un virus d'ARN double brin, et une protéine possédant la séquence d'acides aminés d'une telle polymérase est utile dans des méthodes et des nécessaires de synthèse d'ARN <i>in vitro</i>. La polymérase de la présente invention présente une capacité de réaction et une très grande vitesse de polymérisation d'ARN, mais ne nécessite pas d'amorce pour initier la synthèse d'ARN, et permet également d'initier une synthèse d'ARN en présence d'une amorce. La synthèse sans amorce est surtout utilisée dans l'amplification d'ARN, afin de quantifier les espèces d'ARN contenues dans l'échantillon et de les identifier par séquençage direct. Cette méthodologie est surtout utilisée dans la détection de parasites pathogéniques et de différences dans les niveaux d'expression des gènes associés à ces maladies.

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