C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/02 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01) C12N 15/64 (2006.01) C12N 15/66 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/70 (2006.01)
Patent
CA 2512196
Disclosed are compositions and methods for amplification of RNA molecules. The disclosed method involves synthesizing first strand cDNA molecules from RNA molecules, circularizing the first strand cDNA molecules and replicating the circularized first strand cDNA molecules using rolling circle replication. The method can be aided by the use of specialized primers for cDNA synthesis and specialized probes for circularizing the first strand cDNA molecules. The method can be used to replicate and amplify multiple RNA molecules, such as all RNA molecules in a sample or all mRNA molecules in a sample, or be used to replicate and amplify specific RNA molecules. Rolling circle replication of the circularized first strand cDNA molecules results in long DNA strands containing tandem repeats of the cDNA sequence. The tandem sequence DNA can be used directly (for detection of sequences, for example), further amplified, or used any other purpose. Doublestranded tandem sequence DNA can be used to produce unit lengths of the cDNA sequence. Tandem sequence DNA can also be transcribed to produce transcripts having sequence complementary to or matching the sequence of RNA molecules.
La présente invention a trait à des compositions et des procédés d'amplification de molécules d'ARN. Les procédés de l'invention comprennent la synthèse de molécules d'ADNc de premier brin à partir de molécules d'ARN, la circularisation de molécules d'ADNc de premier brin et la réplication des molécules d'ADNc de premier brin circularisées au moyen de modèle de cercle roulant. Le procédé peut être assisté par l'utilisation d'amorces spécialisées pour la synthèse d'ADNc et de sondes spécialisées pour la circularisation de molécules d'ADNc de premier brin. Le procédé peut être utilisé pour la réplication et l'amplification de multiples molécules d'ARN, telles que toutes les molécules d'ARN dans un échantillon ou toutes les molécules d'ARNm dans un échantillon, ou être utilisé pour la réplication et l'amplification de molécules ARN spécifiques. Le modèle de cercle roulant des molécules d'ADNc de premier brin circularisées conduit à de longs brins contenant des répétitions en tandem de la séquence d'ADNc. La séquence d'ADN à répétitions peut être utilisée directement (pour la détection de séquences, par exemple), amplifiée davantage, ou utilisée à toute autre fin. La séquence d'ADN à répétition double brin peut être utilisée pour la production de longueurs unitaires de la séquence d'ADN. La séquence d'ADN à répétitions peut également être transcrite pour la production de transcrits présentant une séquence complémentaire ou appariée à la séquence de molécules d'ARN.
Abarzua Patricio
Kumar Gyanendra
Qiagen Gmbh
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1696890