Screening method

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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Details

C12N 15/12 (2006.01) C07K 14/435 (2006.01) C07K 14/705 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 9/72 (2006.01) C12N 9/86 (2006.01) C12N 15/57 (2006.01) C12N 15/58 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) C12Q 1/70 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01)

Patent

CA 2596715

In one aspect the invention relates to a method for identifying inhibitors of viral entry comprising providing an indicator cell wherein said cell expresses a reporter gene and wherein said cell is capable of supporting entry by an effector particle, providing a candidate inhibitor of viral entry, co- compartmentalising said candidate inhibitor and said indicator cell, contacting said indicator cell with an effector particle, incubating to allow any effector particle entry to take place, and assaying said indicator cell for reporter gene activity, wherein detection of reporter gene activity identifies the candidate inhibitor as an inhibitor of viral entry. Preferably the effector particle is HIV, preferably the reporter gene is a CD4-.beta.- lactamase fusion or a tPA fusion, preferably the reporter gene activity is assayed by cleavage of an inert substrate into a fluorescent product.

Dans un aspect, l'invention a trait à un procédé permettant d'identifier des inhibiteurs de l'entrée virale. Le procédé selon l'invention consiste : à fournir une cellule indicatrice, ladite cellule exprimant un gène rapporteur et pouvant accepter l'entrée d'une particule effectrice ; à fournir un inhibiteur de l'entrée virale candidat ; à co-compartimenter ledit inhibiteur candidat et ladite cellule indicatrice ; à mettre ladite cellule indicatrice en contact avec une particule effectrice ; à procéder à une incubation afin de permettre l'entrée d'une particule effectrice ; et à doser ladite cellule indicatrice afin de rechercher une activité du gène rapporteur, ladite détection de l'activité du gène rapporteur identifiant l'inhibiteur candidat comme étant un inhibiteur de l'entrée virale. La particule effectrice est de préférence le VIH, le gène rapporteur est de préférence une fusion CD4-ß-lactamase ou une fusion tPA, et l'activité du gène rapporteur est de préférence dosée par le clivage d'un substrat inerte en un produit fluorescent.

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