Selectable/reporter gene for use during genetic engineering...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 15/82 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 9/78 (2006.01) C12N 15/55 (2006.01)

Patent

CA 2134261

Adenosine deaminase gene (ADA gene) is used as a selectable/reporter gene for plant cells and plants. When introduced into plant cells, the ADA gene makes the cells resistant to inhibition by 2-deoxyadenosine or an analog, so transformed cells can be separated from non-transformed cells by culturing a cell mixture in a medium containing 2-deoxyadenosine or an analog in amounts that inhibit normal plant cells. A single vector may be constructed containing an ADA gene from any source (e.g. a mouse ADA gene) and an additional gene-of-interest to be introduced into plant cells. The vector may then be introduced into the cells by such a route as Agrobacterium infection or micro projectile bombardment. The presence of the ADA gene in successfully transformed plant cells may be confirmed by cultivating the cells in a medium containing 2-deoxyadenosine or an analog in the presence of a material that changes color in the presence of ammonia. Observation of a color change confirms the presence of the gene. DNA constructs containing both ADA genes and foreign genes-of-interest may be constructed, e.g. plasmid pRD360-ADA (ATCC 69459).

Le gène de l'adénosine désaminase (gène de l'ADA) sert comme gène sélectif/marqueur pour cellules végétales et végétaux. Lorsqu'il est introduit dans les cellules végétales, le gène de l'ADA rend les cellules résistantes à l'inhibition par la 2-désoxyadénosine ou un analogue de celle-ci; les cellules transformées peuvent ainsi être séparées des cellules non transformées par culture d'un mélange cellulaire dans un milieu renfermant la 2-désoxyadénosine ou un analogue de celle-ci, en quantité telle qu'il y a inhibition des cellules végétales normales. Un vecteur unique peut être élaboré, renfermant un gène d'ADA provenant de n'importe quelle source (p. ex. un gène d'ADA de souris), ainsi qu'un gène supplémentaire approprié, pour introduction ultérieure dans les cellules végétales. Le vecteur peut ensuite être introduit dans les cellules, par exemple via l'infection par des agrobactéries ou par bombardement à l'aide de micro-projectiles. La présence du gène de l'ADA dans des cellules végétales transformées efficacement peut être confirmée par la culture des cellules dans un milieu renfermant la 2-désoxyadénosine ou un analogue de celle-ci en présence d'une matière qui change de couleur en présence d'ammoniac. L'observation d'un changement de couleur confirme la présence du gène. L'ADN synthétique renfermant à la fois des gènes d'ADA et des gènes étrangers appropriés peut ainsi être mis au point, notamment le plasmide pRD360-ADA (ATCC 69459).

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