Selection of host cells expressing protein at high levels

Details Selection of host cells expressing protein at high levels Selection of host cells expressing protein at high levels

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/85 (2006.01)

Patent

CA 2637271

The invention provides a DNA molecule comprising a multicistronic transcription unit coding for i) a polypeptide of interest, and for ii) a selectable marker polypeptide functional in a eukaryotic host cell, wherein the polypeptide of interest has a translation initiation sequence separate from that of the selectable marker polypeptide, and wherein the coding sequence for the polypeptide of interest is upstream from the coding sequence for the selectable marker polypeptide in said multicistronic transcription unit, and wherein an internal ribosome entry site (IRES) is present downstream from the coding sequence for the polypeptide of interest and upstream from the coding sequence for the selectable marker polypeptide, and wherein the nucleic acid sequence coding for the selectable marker polypeptide in the coding strand comprises a GTG or a TTG startcodon. The invention also provides methods for obtaining host cells expressing a polypeptide of interest, said host cells comprising the DNA molecules of the invention. The invention further provides the production of polypeptides of interest, comprising culturing host cells comprising the DNA molecules according to the invention.

L'invention concerne une molécule d'ADN comprenant une unité de transcription multicistronique codant pour i) un polypeptide présentant un intérêt et pour ii) un polypeptide marqueur sélectionnable fonctionnel dans une cellule hôte eucaryote, caractérisée en ce que le polypeptide présentant un intérêt a une séquence d'initiation de la traduction séparée de celle du polypeptide marqueur sélectionnable et la séquence codante pour le polypeptide présentant un intérêt est en amont de la séquence codante pour le polypeptide marqueur sélectionnable dans ladite unité de transcription multicistronique et un site interne d'entrée des ribosomes (IRES) est présent en aval de la séquence codante pour le polypeptide présentant un intérêt et en amont de la séquence codante pour le polypeptide marqueur sélectionnable et la séquence d'acides nucléiques codante pour le polypeptide marqueur sélectionnable dans le brin codant comprend un codon d'initiation GTG ou TTG. L'invention concerne également des procédés servant à obtenir des cellules hôtes exprimant un polypeptide présentant un intérêt, lesdites cellules hôtes comprenant les molécules d'ADN de l'invention. L'invention concerne en outre la production de polypeptides présentant un intérêt, consistant à effectuer la culture de cellules hôtes comprenant les molécules d'ADN selon l'invention.

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