Selective ligation and amplification method

Details Selective ligation and amplification method Selective ligation and amplification method

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2282733

The present invention provides a method for amplifying a specific target nucleic acid sequence. The method comprises (1) forming a reaction mixture comprising: (i) the target sequence; (ii) primers comprising a first primer at least a portion of which at the 3' end thereof is substantially complementary to a first segment at a first end of the target sequence, a second primer at least a portion of which at the 5' end thereof is substantially complementary to a second segment at a second end of the target sequence, the 5' end of the second primer being adjacent the 3' end of the first primer, and a third primer, the third primer being substantially complementary to a segment of the second primer at the 3' end thereof; (iii) at least four different nucleotide bases; (iv) thermostable polymerase and thermostable ligase; and (2) thermocycling the reaction mixture.

Cette invention a trait à une méthode permettant l'amplification d'une séquence nucléotidique cible, laquelle méthode consiste, d'une part, (1), à constituer un mélange réactionnel comportant, (i), la séquence cible, (ii), des amorces comprenant une première amorce dont au moins une partie est, sur l'extrémité 3', sensiblement complémentaire d'un premier segment à la première extrémité de la séquence cible, une deuxième amorce dont au moins une partie est, sur l'extrémité 5', sensiblement complémentaire d'un second segment à la seconde extrémité de la séquence cible, l'extrémité 5' de la deuxième amorce étant contiguë de l'extrémité 3' de la première amorce, et une troisième amorce, sensiblement complémentaire d'un segment de la deuxième amorce sur l'extrémité 3' de celle-ci, (iii), au moins quatre bases nucléotidiques différentes et, (iv), une polymérase et une ligase stables et, d'autre part, (2), à soumettre le mélange réactionnel à une succession de cycles thermiques.

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Profile ID: LFCA-PAI-O-1588863