G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/52 (2006.01) C12Q 1/02 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)
Patent
CA 2417556
The invention relates to a simple quantitative fluorescent assay method for determining the activity of transport proteins, more specifically multi-drug resistance associated proteins (MRPs). The method of the invention is performed on a well sealed culture of polarized cells expressing a transport protein of interest grown to confluency on a permeable support, said confluent cell culture forming well separated apical and basolateral compartments. The cells are contacted with a cell permeable non-fluorescent derivative of a fluorescent compound (e.g. calcein AM) in one compartment and, after a certain period of incubation, the fluorescence intensity detected in a sample taken from the opposite compartment is indicative of the activity of the transport protein of interest expressed in the cells. The invention also concerns methods for the qualitative and quantitative determination of inhibitors and activators of transport proteins of interest and methods for assessing basolateral and/or apical localization of plasma membrane bound transport proteins of interest in polarized cells.
L'invention porte sur une méthode de dosage fluorescent, quantitatif, simple visant à déterminer l'activité des protéines de transport, plus spécifiquement des protéines associées à la résistance à plusieurs médicaments. Le procédé est effectué sur une culture à puits hermétiques de cellules polarisées exprimant une protéine de transport d'intérêt développée jusqu'à confluer sur un support perméable, cette culture cellulaire confluente formant des compartiments apicaux et basolatéraux séparés par des puits. Les cellules sont mises en contact avec un dérivé non fluorescent perméable aux cellules d'un composé fluorescent (tel que la calcéine AM) dans un compartiment et, au bout d'un certain temps d'incubation, l'intensité de la fluorescence détectée dans un échantillon pris dans le compartiment opposé indique l'activité de la protéine de transport exprimée dans le cellules. L'invention porte également sur des procédés visant à déterminer de manière qualitative et quantitative des inhibiteurs et des activateurs des protéines de transport et sur des procédés d'évaluation de la localisation basolatérale et/ou apicale des protéines de transport liées à la membrane cellulaire dans les cellules polarisées.
Evers Raymond
Homolya Laszlo
Sarkadi Balazs
Fetherstonhaugh & Co.
Solvo Biotechnology
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1950878