C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2725212
The present invention relates to a method for simultaneously amplifying and detecting nucleic acid sequences in a reaction comprising the following steps: (i) providing a sample comprising at least one nucleic acid molecule; (ii) providing reagents for performing an amplification reaction, wherein the reagents comprise at least four, preferably at least five, more preferably at least six probes, wherein (a) each of the probes is specific for a nucleic acid sequence; (b) at least two, preferably at least three probes carry the same label; and (c) each of the probes that carry the same label has a melting temperature (Tm) which differs by more than 2°C from the other probes with the same label when they are dissociated from their target nucleic acid sequence by heating; (iii) amplifying the nucleic acid sequences in the reaction; (iv) detecting the amplified nucleic acids by determining whether the labeled probe has bound its nucleic acid sequence; and (v) detecting the temperature at which each given labeled probe dissociates from the nucleic acid sequence to which it has bound. The invention also relates to kits for the use in such a method.
La présente invention porte sur un procédé pour l'amplification et la détection simultanée de séquences d'acide nucléique dans une réaction consistant à : (i) prévoir un échantillon contenant au moins une molécule d'acide nucléique ; (ii) à prévoir des réactifs pour effectuer une réaction d'amplification, les réactifs comportant au moins quatre, de préférence au moins cinq, de préférence encore au moins six sondes, (a) chacune des sondes étant spécifique pour une séquence d'acide nucléique ; (b) au moins deux, de préférence au moins trois sondes portant le même marqueur ; et (c) chacune des sondes qui portent le même marqueur présentant une température de fusion (Tm) qui diffère de plus de 2 °C de celle des autres sondes avec le même marqueur lorsqu'elles sont dissociées de leur séquence d'acide nucléique cible par chauffage ; (iii) à amplifier les séquences d'acide nucléique dans la réaction ; (iv) à détecter les acides nucléiques amplifiés en déterminant si la sonde marquée s'est fixée à sa séquence d'acide nucléique ; et (v) à détecter la température à laquelle chaque sonde marquée donnée se dissocie de la séquence d'acide nucléique à laquelle elle s'est fixée. L'invention porte également sur des kits destinés à être utilisés dans un tel procédé.
Engel Holger
Rohthmann Thomas
Qiagen Gmbh
Qiagen Hamburg Gmbh
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1978311