Single primer pcr amplification of rna

Details Single primer pcr amplification of rna Single primer pcr amplification of rna

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01)

Patent

CA 2416091

The invention provides methods and compositions for amplifying RNA sequences by: a) hybridizing to a target RNA a first primer comprising a 3' target RNA hybridizing sequence and a first 5' defined amplifyable sequence; b) extending the first primer with a reverse transcriptase to form a first cDNA strand; c) hybridizing to the first cDNA strand a second primer comprising a 3' random cDNA hybridizing sequence and a second 5' defined amplifyable sequence; d) extending the second primer with a DNA polymerase to form a second cDNA strand; and e) amplifying the second cDNA strand with a third primer comprising the first 5' defined amplifyable sequence.

L'invention concerne des procédés et des compositions permettant d'amplifier des séquences d'ARN. Les procédés consistent (a) à hybrider une première amorce renfermant une séquence d'hybridation cible d'ARN en 3', ainsi qu'une première séquence définie pouvant être amplifiée en 5' à une cible d'ARN; (b) à étendre la première amorce au moyen d'une transcriptase inverse, de manière à former un premier brin d'ADNc; (c) à hybrider une seconde amorce renfermant une séquence d'hybridation aléatoire d'ADNc en 3' et une seconde séquence définie pouvant être amplifiée en 5' au premier brin d'ADNc; (d) à étendre la seconde amorce au moyen d'une polymérase ADN, de manière à former un second brin d'ADNc; et (e) à amplifier le second brin d'ADNc au moyen d'une troisième amorce renfermant la première séquence définie pouvant être amplifiée en 5'.

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