Single-step excision means

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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Details

C12N 15/82 (2006.01) A01H 5/00 (2006.01) C12N 15/87 (2006.01)

Patent

CA 2250111

The present invention is directed to the genetic transformation using multiple genetic sequences, wherein one of said genetic sequences encodes a polypeptide possessing excision activity, specifically a site-specific recombinase activity linked to a transgene unit and the use of this genetic construct in the removal of transgenes therefrom. The present invention provides the means to produce genetically-transformed organisms, in particular plants, in which selectable marker genes have been removed, thereby facilitating multiple sequential genetic transformation events using the same selectable marker gene. Accordingly, the invention provides the means for regulating transgene expression in genetically-manipulated organisms, for example to promote differentiation, de-differentiation, or any unidirectional developmental shift of a target cell which requires the time-specific expression of a particular gene. The invention is particularly suited to the promotion of specific organogeneses in plants using organogenesis-promoting transgenes, wherein the organs which subsequently develop in said plants are genetically transformed with a desired gene but lack organogenesis-promoting transgenes.

L'invention concerne une transformation génétique faisant appel à de multiples séquences géniques, où une desdites séquences géniques code pour un polypeptide ayant une activité d'excision et, plus précisément, une activité de recombinase spécifique d'un site liée à une unité transgénique, et l'utilisation de ce produit de recombinaison génétique pour éliminer les transgènes de ce site. L'invention permet de produire des organismes transformés génétiquement, en particulier des plantes, où des gènes marqueurs choisis ont été enlevés, ce qui facilite l'exécution d'opérations successives et multiples de transformations génétiques en utilisant le même gène marqueur choisi. L'invention permet donc de réguler l'expression de transgènes dans des organismes modifiés génétiquement, par exemple pour favoriser la différentiation, la dédifférenciation ou tout glissement dans une direction du développement d'une cellule cible qui nécessite l'expression spécifique dans le temps d'un gène particulier. L'invention est particulièrement utile pour favoriser des organogenèses particulières dans des plantes, en utilisant des transgènes favorisant ces organogenèses, où les organes qui se développent subséquemment dans lesdites plantes sont transformées génétiquement avec le gène souhaité, mais n'ont pas les transgènes favorisant l'organogénèse.

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