C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/82 (2006.01) A01H 5/00 (2006.01) A01H 5/10 (2006.01)
Patent
CA 2747666
A targeting method is described that allows precise cassette replacement at a previously characterized genetic locus. A target DNA construct containing a pair of incompatible fort sites flanking a target cassette was introduced into soybean by regular biolistic transformation. Transgenic events containing a single complete copy of the target site were then selected and retransformed with a donor DNA construct containing the identical pair of incompatible FRT sites flanking a donor cassette. Precise DNA cassette exchange happened between the target cassette and the donor cassette via recombinase mediated cassette exchange (RMCE) so that the donor cassette was introduced at the exact genomic site previously occupied by the target cassette. Through repeated RMCE using additional incompatible FRT sites, multiple groups of transgenes can be stacked at the same genomic locus.
La présente invention porte sur un procédé de ciblage qui permet un remplacement précis de cassette à un locus génétique préalablement caractérisé. Un produit de construction d'ADN cible contenant une paire de sites FRT incompatibles flanquant une cassette cible a été introduit dans du soja par transformation biolistique ordinaire. Des événements transgéniques contenant une simple copie complète du site cible ont été ensuite sélectionnés et retransformés par un produit de construction d'ADN de donneur contenant la paire identique de sites FRT incompatibles flanquant une cassette de donneur. Un échange précis de cassette d'ADN a eu lieu entre la cassette cible et la cassette de donneur par un échange de cassette médiée par une recombinase (RMCE) de telle sorte que la cassette de donneur a été introduite au site génomique exact préalablement occupé par la cassette cible. Par RMCE répété utilisant des sites FRT incompatibles supplémentaires, de multiples groupes de transgènes peuvent être empilés au même locus génomique.
Falco Saverio Carl
Li Zhongsen
E. I. Du Pont de Nemours And Company
Torys Llp
LandOfFree
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