Size-based marker identification technology

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C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/90 (2006.01)

Patent

CA 2240499

A method for identifying a cell or strain of cells containing a mutation in a gene involved in growth, comprising the steps of forming a labeled set of strains comprising a plurality of members, each member of the set containing an exogenous DNA fragment of a defined length stably integrated into the chromosome of a member, the defined length in each member differing from the defined length in other members, subjecting the labeled set of strains to mutagenesis so as to obtain mutants from each member of the set of strains, and introducing the mutant strains into a growth environment for a period of time sufficient for growth of a non-mutated strain and determining which strains have reduced growth compared to a non-mutated strain, by determining the presence and size of exogenous DNA fragments relative to each other using PCR and agarose/polyacrylamide gel electrophoresis.

L'invention concerne un procédé pour identifier une cellule ou une souche de cellules contenant une mutation dans un gène jouant un rôle dans la croissance. Ce procédé comprend les étapes consistant à former un ensemble marqué de souches contenant plusieurs membres, chaque membre de l'ensemble contenant un fragment d'ADN exogène d'une longueur définie, intégrée avec stabilité dans le chromosome du membre. La longueur définie de chaque membre diffère de la longueur définie des autres membres. Ce procédé consiste également à soumettre l'ensemble marqué de souches à une mutagénèse de manière à obtenir des mutants à partir de chaque membre de l'ensemble de souches, et à introduire les souches mutantes dans un environnement de croissance pendant un laps de temps suffisant pour la croissance d'une souche n'ayant pas subi de mutation. Il consiste ensuite à déterminer les souches qui présentent une croissance réduite par rapport à une souche n'ayant pas subi de mutation, en déterminant la présence et la taille des fragments d'ADN exogènes les uns par rapport aux autres, à l'aide de la polymérase en chaîne et de l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide/agarose.

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